公开(公告)号 | CN1641025A |
公开(公告)日 | 2005.07.20 |
申请(专利)号 | CN200410097557.8 |
申请日期 | 2004.11.29 |
专利名称 | 真鲷抗菌肽基因和重组酵母表达载体及其制备方法 |
主分类号 | C12N15/12 |
分类号 | C12N15/12;C12N15/81;C12N15/10;C07K14/46;C12N15/66;C12N15/09;C12P21/02 |
分案原申请号 | |
优先权 | |
申请(专利权)人 | 中国水产科学研究院黄海水产研究所 |
发明(设计)人 | 陈松林;徐美瑜;隋少飞 |
地址 | 266071山东省青岛市南京路106号 |
颁证日 | |
国际申请 | |
进入国家日期 | |
专利代理机构 | 青岛联智专利商标事务所有限公司 |
代理人 | 袁和善 |
国省代码 | 山东;37 |
主权项 | 一种真鲷抗菌肽基因和重组酵母表达载体及制备方法,其特征在于它的真鲷抗菌肽基因的克隆主要包括cDNA文库构建、EST序列测定和DNA序列分析与比对:cDNA文库构建:用TRIzol试剂盒从真鲷脾脏中提取总RNA,用OligotexTM离心柱试剂盒分离Poly-(A)RNA,用pBluescriptIIXRcDNA文库试剂盒构建cDNA文库;EST序列测定:用快速微量制备方法制备质粒DNA,质粒制备在96孔板上完成;用T3定序试剂盒测定cDNA片段的序列,用T3和T7引物从cDNA片段的两端分别进行测序,从而获得全长序列;DNA序列分析与比对:在测定EST序列后,用Cross-Match软件掩盖载体序列,然后将从cDNA文库中获得的序列与美国GENBANK序列数据库中已存的DNA序列进行比对,用PHRAP聚类程序鉴定共同序列和单一序列;用BLASTN和BLASTX程序计算我们获得的cDNA克隆片段与GENBANK序列数据库中已存的DNA序列的同源性。 |
摘要 | 一种真鲷抗菌肽基因和重组酵母表达载体及其制备方法,通过文库筛选和EST序列分析,克隆出真鲷抗菌肽(hepcidin)基因,将该基因重组到酵母表达载体pPICZαA,构建成抗菌肽基因表达质粒pPICZ-rsbHEPC1,转化毕赤酵母后,获得了稳定表达真鲷抗菌肽的酵母菌株。细菌生长抑制实验表明重组抗菌肽对大肠杆菌,绿脓杆菌和嗜水气单胞菌等4种细菌均具有剂量依存的抑制活性。本发明首次构建了鱼类抗菌肽(hepcidin)基因酵母表达质粒并研制了重组抗菌肽表达产物,该表达质粒在酵母体内表达稳定,重组抗菌肽分子量小,抑菌活性明显,适宜用作鱼类等水产动物的饲料添加剂。本发明适用于各种鱼类抗菌肽基因克隆和表达载体的构建,生产的基因工程鱼类抗菌肽可作为饲料添加剂,用于鱼类等水产动物的疾病防治。 |
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