| 公开(公告)号 | CN1648241A |
| 公开(公告)日 | 2005.08.03 |
| 申请(专利)号 | CN200410005061.3 |
| 申请日期 | 2004.01.19 |
| 专利名称 | 一种牛肾上腺髓质嗜铬细胞分离纯化的方法 |
| 主分类号 | C12N5/06 |
| 分类号 | C12N5/06 |
| 分案原申请号 | |
| 优先权 | |
| 申请(专利权)人 | 中国科学院大连化学物理研究所 |
| 发明(设计)人 | 马小军;张晓慧;王为 |
| 地址 | 116023辽宁省大连市中山路457号 |
| 颁证日 | |
| 国际申请 | |
| 进入国家日期 | |
| 专利代理机构 | 中科专利商标代理有限责任公司 |
| 代理人 | 周长兴 |
| 国省代码 | 辽宁;21 |
| 主权项 | 一种牛肾上腺髓质嗜铬细胞分离纯化的方法，其主要步骤是：分离：a)选择牛肾上腺，保存于0-6℃的D-Hank’s液中；b)逆静脉灌注无钙、镁D-Hank’s液后，将肾上腺浸泡在D-Hank’s液中，使残留在血管中的血细胞充分渗出；c)逆肾上腺静脉灌注质量百分比浓度为0.05-0.15％的I型胶原酶2-7ml，在37℃恒温震荡水浴中消化20-50min，使皮质和髓质及髓质细胞之间的胶原成分充分解离；d)剥除皮质，将髓质剪碎成0.5-5mm3左右的小块，滴加D-Hank’s液以保持髓质的营养；e)将剪切后的髓质块依次研磨过50、200、350目筛网，并用D-Hank’s液冲洗过滤；收集的细胞用D-Hank’s液离心洗涤，最终接种于含有体积比5-20％牛血清的DMEM培养液中；纯化：f)分别配制密度为090g/ml、064g/ml、034g/ml和019g/ml的Percoll溶液；g)将分离步骤中e制得的细胞悬液沉淀，与密度为090g/ml的Percoll溶液混悬后，加入离心管底，在其上依次加入密度为064g/ml、034g/ml、019g/ml的Percoll溶液离心；h)收集介于密度为064g/ml与034g/ml的Percoll溶液之间的细胞，加入D-Hank’s液离心洗涤；最终将细胞接种于含有体积比5-20％牛血清的DMEM培养液中培养。 |
| 摘要 | 一种牛肾上腺髓质嗜铬细胞分离纯化的方法，逆肾上腺静脉灌注胶原酶溶液，在一定温度下，充分水解肾上腺髓质细胞与皮质细胞、髓质细胞之间的胶原蛋白成分。剥离后的髓质通过机械剪切和梯度过筛，得到离散的肾上腺嗜铬细胞悬液，再利用悬液中细胞密度的差异将细胞进行纯化。利用Percoll非连续密度梯度法纯化牛肾上腺嗜铬细胞，平均每个肾上腺可分离得到0.7×108～3.1×108个纯度在95％以上的嗜铬细胞，而且细胞形态良好、活性达到99％。 |
| 国际公布 |
