公开(公告)号 | CN1660878A |
公开(公告)日 | 2005.08.31 |
申请(专利)号 | CN200410081443.4 |
申请日期 | 2004.12.10 |
专利名称 | 一种快速大量提纯质粒DNA的新方法 |
主分类号 | C07H21/04 |
分类号 | C07H21/04;C07H1/06 |
分案原申请号 | |
优先权 | |
申请(专利权)人 | 四川农业大学;王红宁 |
发明(设计)人 | 王红宁;汪洋;周生;胡慧琼;余祖华;陈萍 |
地址 | 625014四川省雅安市新康路四川农业大学科技管理处 |
颁证日 | |
国际申请 | |
进入国家日期 | |
专利代理机构 | |
代理人 | |
国省代码 | 四川;51 |
主权项 | 一种快速大规模提纯质粒DNA的新方法,其特征材料在于包括:(1)菌体清洗液,组分为0.1mmol/LNaCl,10mmol/LTris-HCl(pH8.0),1mmol/LEDTA(pH8.0);(2)菌体重悬缓冲液(R1),R1的组分为50mmol/L葡萄糖、25mmol/LTris-Cl(pH8.0),10mmol/LEDTA(pH8.0),200μgRnaseA;(3)菌体裂解液(R2),R2的组分为200mmol/LNaOH,1%SDS;(4)裂解中和液(R3),R3的组分为4mmol/LKAc,pH4.8;(5)异丙醇(R4),R4的组分为商业分析纯试剂;(6)硅藻土悬液(R5),R5的组分为5克硅藻土与50ml7mol/盐酸胍混合,取用时摇匀;(7)蛋白洗涤液(R6),R6的组分为50%乙醇,100mmol/LNaCl,10mmol/LTris-HCl(pH7.5),5mmol/LEDTA;(8)80%乙醇(R7),R7的组分为80%的分析纯的乙醇;(9)DNA稀释液(R8),R8的组分为TE缓冲液(10mmol/LTris-HClpH7.5,1mmol/LEDTA);(10)另需有若干50--100ml离心管。 |
摘要 | 本发明涉及分子生物学研究领域,为一种简易快速大规模提纯质粒DNA的新方法。本方法所用试剂包括菌体清洗液、菌体重悬缓冲液、菌体裂解液、裂解中和液、异丙醇、硅藻土悬液、蛋白洗涤液、80%乙醇、DNA稀释液九种试剂和50ml-100ml离心管。本发明与现有提纯方法比较操作简便,一次提取仅需90分钟。本发明结果稳定,得量高,纯度好,无蛋白质和RNA污染,与应用Qiagen柱式纯化试剂盒和国产赛百盛树脂型试剂盒提取相同的质粒DNA比较,所得DNA的电泳条带同样清晰,无RNA混杂。本发明价格低廉,不需用酚和氯仿等有毒试剂,经放大可用于DNA疫苗的制备。 |
国际公布 |