公开(公告)号 | CN1680582A |
公开(公告)日 | 2005.10.12 |
申请(专利)号 | CN200510013096.6 |
申请日期 | 2005.01.14 |
专利名称 | 微生物转化法制备雌酚酮的方法 |
主分类号 | C12P33/00 |
分类号 | C12P33/00;C12N1/20;//(C12P33/00,C12R1∶06) |
分案原申请号 | |
优先权 | |
申请(专利权)人 | 天津科技大学 |
发明(设计)人 | 杜连祥;路福平;王敏;别松涛 |
地址 | 300222天津市河西区大沽南路1038号 |
颁证日 | |
国际申请 | |
进入国家日期 | |
专利代理机构 | 天津市学苑有限责任专利代理事务所 |
代理人 | 李明 |
国省代码 | 天津;12 |
主权项 | 微生物转化法制备雌酚酮的方法,其特征是采用微生物转化法制备雌酚酮,即采用简单节杆菌(ArthrobactersimplexAS1.94*)为菌种,经制备悬液、一级种子培养、二级发酵培养、底物转化和产物的分离提取;通过控制培养期和转化期的相关工艺,并采用丙酮和水分离产物雌酚酮,获得符合USP26版标准的雌酚酮;具体步骤如下:一、制备用于转化底物的发酵液·菌种悬液的制备生产菌种为简单节杆菌,将该生产菌株在琼脂斜面上生长1-2天后,4℃保藏待用,保藏时间在20d之内为宜;其中,制作菌体种子悬液采用的液体为无菌水或新鲜种子培养基,灭菌条件为:121℃,灭菌时间20~25min;·一级种子培养将上述制好的种子悬液加入到含碳源、氮源和无机磷组成的种子培养基中,在摇床上150~180r/min转速下,30~33℃培养18~22h,即得适合接种的种子培养物;·二级发酵培养将生长良好的种子按2%~5%(v/v)的接种量接入到含有玉米浆、蛋白胨,葡萄糖、磷酸二氢钾的发酵培养基中;在发酵过程中控制溶氧水平在30%~50%,pH值保持在6.7~7.2,培养18~22h,即得菌体培养液;·底物的转化底物为(I)或(II),底物(I)的结构式为:其中R1为CH3CO-、HCO-或H-;底物(II)的结构式为:其中R1为CH3CO-、HCO-或H-;R2为CH3CO-或HCO-;将底物(I)或(II)粉碎,粒度14~16μ,在无菌条件下迅速投入到培养好的发酵液中,投料量为12~20g/L发酵液体积,并加入消泡剂,在转化过程中控制溶氧水平在20%~40%,pH值为7.0左右,转化36~60h,通过薄层层析或高效液相来测定转化率,当转化率在70~95%时作为发酵终点;二、从发酵液中提取、分离雌酚酮该步骤包括:发酵液过滤、将固型物滤饼在丙酮中回流、过滤得粗品,保留滤液、去除菌体,再在滤液中加入纯水后得到固型产物。具体做法如下:(1)、发酵液去除菌体底物转化结束后,将发酵液减压过滤,取固型物滤饼、烤干,然后加入丙酮,回流溶解至澄清,再经过滤,保留滤液,除去菌体;(2)、产物的分离与精制在上述滤液中,加入相当于滤液体积2-4倍的水,有固体产物析出后,减压过滤,然后用水洗涤上述固体产物,再经烘干,即得质量符合USP26版标准的雌酚酮成品(III)。 |
摘要 | 微生物转化法制备雌酚酮的方法,属于微生物制备技术。涉及以简单节杆菌为菌种,甾体(I和II)为底物,制备雌酚酮技术。本发明解决了甾体A环芳构化的难题,为生物发酵法制备雌激素药物提供一种新的路线和方法。其技术方案是:采用简单节杆菌经菌种悬液的制备、一级种子培养、二级发酵培养、底物转化和产物的分离提取工序,其中底物投料量为12~20g/L发酵液,溶氧水平在30%~50%,转化36~60h;并采用丙酮-水法特异性的分离产物使获得的产物雌酚酮符合USP 26版标准。本发明工艺简单、经济实用,提高了雌酚酮的活性和质量,缩短了生产周期,降低了生产成本,促进绿色化工业的发展,既有经济效益又有社会效益。 |
国际公布 |