公开(公告)号 | CN1244694C |
公开(公告)日 | 2006.03.08 |
申请(专利)号 | CN00113802.2 |
申请日期 | 2000.04.28 |
专利名称 | 牦牛血超氧化物歧化酶制备方法 |
主分类号 | C12N9/08(2006.01)I |
分类号 | C12N9/08(2006.01)I;C07K1/36(2006.01)I;A61K38/44(2006.01)I;A61K8/66(2006.01)I;A23L1/30(2006.01)I;A61P25/28(2006.01)I |
分案原申请号 | |
优先权 | |
申请(专利权)人 | 苏 普 |
发明(设计)人 | 苏 普 |
地址 | 730050甘肃省兰州市小西湖硷沟沿211号 |
颁证日 | |
国际申请 | |
进入国家日期 | |
专利代理机构 | 兰州中科华西专利代理有限公司 |
代理人 | 王玉双 |
国省代码 | 甘肃;62 |
主权项 | 一种牦牛血超氧化物歧化酶的制备方法,其特征在于包括下述工艺步骤:①将牦牛血除去血浆得红血球,用红血球体积的2-4倍、0.5-1.5%的盐液清洗红血球2-6次,再往红血球内加入体积比为1∶(0.5-1.5)的水,搅拌后使其溶血;②将溶血液冷却至-4-4℃,搅拌加入溶血液体积的0.15-0.35倍、温度为至少-10℃、90-98%的醇和溶血液体积的0.1-0.2倍、90-98%的氯仿,混合搅拌,再加入溶血液体积的0.2倍的水稀释,离心去除杂蛋白,得蛋黄色上清液,测定其SOD总活力;③将乙醇相上清液升至室混,加入上清液体积的0.5-1.5倍的固体磷酸氢二钾溶解,静置分离得上清液,上相液含有氯仿、醇和少量盐,离心上相液得淡蓝色上清液;④将③步中最后的上清液冷却至至少0℃,边搅边加入上清液体积的0.5-1倍、温度为至少-10℃的丙酮,离心后得蓝绿色沉淀,然后往沉淀物中加入沉淀物体积的0.5-1.5倍的水溶解;溶解液放透析袋中相对于2.5mM、pH7.6的KH2PO4-K2HPO4缓冲液透析,离心透析液得淡绿色清液;⑤将淡绿色清液超滤即得牦牛血红胞超氧化物歧化酶。 |
摘要 | 本发明涉及一种牦牛血超氧化物歧化酶及其提取纯化工艺和应用,所述的超氧化物歧化酶是将牦牛血经去血浆、洗涤、溶血、抽提去杂蛋白、分离、沉淀、透析、超滤浓缩后得到牦牛血SOD;本发明的酶总活力高达90万单位/l,平均酶比活为13000u/mg,本发明的工艺可减少SOD的酶总活损失,得率高、生产周期短、使用试剂省、操作简单;本发明可作药品、保健品和食品、化妆品添加剂用。 |
国际公布 |