| 公开(公告)号 | CN1244696C |
| 公开(公告)日 | 2006.03.08 |
| 申请(专利)号 | CN03131567.4 |
| 申请日期 | 2003.05.27 |
| 专利名称 | 白细胞介素－12的高效表达方法 |
| 主分类号 | C12N15/24(2006.01)I |
| 分类号 | C12N15/24(2006.01)I;C12N5/08(2006.01)I |
| 分案原申请号 | |
| 优先权 | |
| 申请(专利权)人 | 中国科学技术大学 |
| 发明(设计)人 | 田志刚;刘文涛;魏海明 |
| 地址 | 230026安徽省合肥市金寨路96号 |
| 颁证日 | |
| 国际申请 | |
| 进入国家日期 | |
| 专利代理机构 | 南京经纬专利商标代理有限公司 |
| 代理人 | 沈 廉 |
| 国省代码 | 安徽;34 |
| 主权项 | 一种白细胞介素-12的表达方法，其特征在于分别将IL-12的P40亚单位编码区cDNA插入pcDNA3真核表达载体、将IL-12的P35亚单位编码区cDNA插入pEE14真核表达载体，分别构建pcDNA3/p40、pEE14/p35两种表达效率不同的真核细胞重组质粒，共转染宿主细胞后，在筛选培养基中同时加入G418和甲硫氨酸亚砜进行筛选，挑取存活的阳性克隆进行鉴定，获得高表达的IL-12的阳性克隆；用甲硫氨酸亚砜对表达IL-12的阳性克隆进行加压扩增，获得具有产业化价值的高表达IL-12的工程细胞株。 |
| 摘要 | 白细胞介素-12的表达方法涉及一种由生物技术制备白细胞介素-12(IL-12)的方法，该方法分别将IL-12的P40亚单位编码区cDNA插入pcDNA3真核表达载体、将IL-12的P35亚单位编码区cDNA插入pEE14真核高效表达载体，分别构建了pcDNA3/p40、pEE14/p35两种真核细胞重组质粒，共转染宿主细胞后，在筛选培养基中同时加入G418和甲硫氨酸亚砜进行筛选，挑取存活的阳性克隆，对各阳性克隆加压扩增，获得高表达IL-12的工程细胞株。该方法简便的利用IL-12 P40和P35天然表达不平衡的特性，采用两种表达效率不同的载体，以使两条链的表达尽量平衡。 |
| 国际公布 |
