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一种用于制备HIV-1病毒载量测定方法外参照的质粒及其应用

公开(公告)号 CN1814800A  
公开(公告)日 2006.08.09  
申请(专利)号 CN200510090185.0  
申请日期 2005.12.16  
专利名称 一种用于制备HIV-1病毒载量测定外参照的质粒及其应用  
主分类号 C12Q1/68(2006.01)I  
分类号 C12Q1/68(2006.01)I;C12N15/63(2006.01)I  
分案原申请号  
优先权  
申请(专利权)人 李卫云;李燕琴  
发明(设计)人 任若通;贲昆龙;李卫云;陈 韵;陈震球;陶 剑  
地址 510623广东省广州市珠江新城南天广场皇朝阁1005  
颁证日  
国际申请  
进入国家日期  
专利代理机构  
代理人  
国省代码 广东;44  
主权项 一种用于制备HIV-1病毒测定的RNA外参照的重组质粒载体,其包含用引物F/R以HIV-1基因组RNA为模板反转录扩增而获得的核酸片段,其中所述引物F/R序列如下: F:5’-CGACTCATGGAGCATCCTGCCTAAG-3’, R:5’-ACAGCGGTCACTTGACGAGTAATCACTAGC-3’。  
摘要 本发明涉及一种用于制备HIV-1病毒量测定用外参照的质粒,建立HIV-1感染者和艾滋病人血浆中HIV病毒量定量测定用外参照的方法以及该外参照在HIV病毒量测定中的应用。其制备方法为:利用HIV外围引物HF/HR从HIV-1IIIB病毒的RNA经反转录—聚合酶链式反应(RT-PCR)得到的HIV-1cDNA片断,克隆到载体以构建含有HIV-1cDNA片断的pZhcT-550重组质粒,转化至大肠杆菌感受态细胞,经PCR鉴定,筛选出阳性克隆子,获得大量重组质粒pZhcT-550。体外转录重组质粒pZhcT-550,获得供HIV病毒载量定量测定使用的RNA外参照,然后在荧光定量PCR仪上通过HIV LUX引物的配合使用,建立了HIV感染者和艾滋病患者血浆中HIV病毒载量的定量测定方法。本发明操作简单,价格便宜,特异性好,灵敏度高,并有较好的可重复性,将为艾滋病的科学研究与防治提供有力工具。  
国际公布  
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