| 公开(公告)号 | CN1285610C |
| 公开(公告)日 | 2006.11.22 |
| 申请(专利)号 | CN03116665.2 |
| 申请日期 | 2003.04.29 |
| 专利名称 | 人促肝再生因子衍生物及其表达 |
| 主分类号 | C07K14/475(2006.01)I |
| 分类号 | C07K14/475(2006.01)I;C12N15/70(2006.01)I;A61K38/17(2006.01)I;A61P1/16(2006.01)I |
| 分案原申请号 | |
| 优先权 | |
| 申请(专利权)人 | 中国人民解放军第二军医大学;上海唯科生物制药有限公司 |
| 发明(设计)人 | 蔡在龙;毛积芳;贺雪峰;陈车生 |
| 地址 | 200433上海市杨浦区翔殷路800号 |
| 颁证日 | |
| 国际申请 | |
| 进入国家日期 | |
| 专利代理机构 | 上海新天专利代理有限公司 |
| 代理人 | 孙跃虹 |
| 国省代码 | 上海;31 |
| 主权项 | 一种人促肝再生因子衍生物的制备方法，该人促肝再生因子衍生物具有下述氨基酸序列： Gly Ser Met Arg Thr Gln Gln Lys Arg Asp Thr Lys Phe Arg Glu Asp 1 5 10 15 Cys Pro Pro Asp Arg Glu Glu Leu Gly Arg His Ser Trp Ala Val Leu 20 25 30 His Thr Leu Ala Ala Tyr Tyr Pro Asp Leu Pro Thr Pro Glu Gln Gln 35 40 45 Gln Asp Met Ala Gln Phe Ile His Leu Phe Ser Lys Phe Tyr Pro Cys 50 55 60 Glu Glu Cys Ala Glu Asp Leu Arg Lys Arg Leu Cys Arg Asn His Pro 65 70 75 80 Asp Thr Arg Thr Arg Ala Cys Phe Thr Gln Trp Leu Cys His Leu His 85 90 95 Asn Glu Val Asn Arg Lys Leu Gly Lys Pro Asp Phe Asp Cys Ser Lys 100 105 110 Val Asp Glu Arg Trp Arg Asp Gly Trp Lys Asp Gly Ser Cys Asp， 115 120 125 其编码相应氨基酸的DNA序列为： ggatccatgc ggacgcagca gaagcgggac accaagttta gggaggactg cccgccggat 60 cgcgaggaac tgggccgcca cagctgggct gtcctccaca ccctggccgc ctactacccc 120 gacctgccca ccccagaaca gcagcaagac atggcccagt tcatacattt attttctaag 180 ttttacccct gtgaggagtg tgctgaagac ctaagaaaaa ggctgtgcag gaaccaccca 240 gacacccgca cccgggcatg cttcacacag tggctgtgcc acctgcacaa tgaagtgaac 300 cgcaagctgg gcaagcctga cttcgactgc tcaaaagtgg atgagcgctg gcgcgacggc 360 tggaaggatg gctcctgtga c 381， 其特征在于该人促肝再生因子衍生物采用的原核细胞大肠杆菌融合表达方法为： 1)提取胎肝总RNA 2)RT-PCR扩增目的片段hALR cDNA 3)纯化PCR产物 4)克隆目的片段至载体pGEM-T 5)重组质粒的筛选和鉴定 6)PCR定点突变修复 7)质粒DNA pGEM-T/hALR cDNA的BamHI、EcoRI双酶切 8)凝胶回收hALR cDNA片段 9)hALR cDNA克隆于原核融合表达载体pGEX-4T-3形成pGEX-4T-3/hALR cDNA 10)转化大肠杆菌进行诱导表达 11)离心收集菌体 12)超声破碎，离心，收集上清液 13)亲和层析柱纯化 14)收集目的峰，加入凝血酶酶切 15)酶切液65℃加热，离心，收集上清，阴离子交换柱纯化，凝胶过滤柱交换缓冲液，分装、冻干；或 阴离子交换柱纯化，凝胶过滤柱纯化，分装、冻干 16)体外、体内活性测定。 |
| 摘要 | 本发明涉及人促肝再生因子衍生物及其在大肠杆菌中的表达。本发明通过大肠杆菌原核融合表达系统，获得具有天然活性，不含内毒素，可大规模生产的重组人促肝再生因子衍生物。 |
| 国际公布 |
