方法名称： |
金荞麦—表儿茶素的含量测定—HPLC |
应用范围： |
本方法适用于金荞麦中表儿茶素含量的测定 |
方法原理： |
本品细粉加50 %乙醇回流提取，经液相色谱分离，在280 nm处测定峰面积，外标法计算含量 |
仪器设备及实验条件： |
仪器 Waters 600E高效液相色谱仪、2487双波长紫外检测器、Millennium32 色谱管理系统 色谱条件 色谱柱：Symmetry C18（150 mm×3.9 mm，5 μm)；流动相：水（用磷酸调pH值至3.00±0.02)—乙腈（92:8)；流速：0.8 mL/min；检测波长：280 nm；柱温：35 ℃；进样量：10 μL |
试样制备： |
对照品溶液制备 精密称取（-)-表儿茶素对照品适量，加乙腈-水（1:9)制成含（-)-表儿茶素30 μg/mL的溶液，即得。 供试品溶液制备 取本品细粉约2.5 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入50 %乙醇50 mL，密塞，称定质量，放置过夜，加热回流1 h，放冷，再称定质量，用50 %乙醇补足减失的质量，摇匀，滤过，精密量取续滤液25 mL，减压浓缩至近干，残渣加乙腈-水（1:9)分次洗涤，洗液转移至10 mL量瓶中，加乙腈-水（1:9)至刻度，摇匀，离心（3000 r/min)5 min，精密量取上清液5 mL，加入聚酰铵柱（30～60目，3 g，内径1.0 cm，湿法装柱)，以水30 mL洗脱，弃去水液，再用甲醇100 mL洗脱，收集洗脱液，减压浓缩至近干，残渣加乙腈-水（1:9)使溶解并转移至10 mL量瓶中，加乙腈-水（1:9)至刻度，摇匀，用微孔滤膜（0.45 μm)滤过，取续滤液，即得。 |
操作步骤： |
分别精密吸取（-)-表儿茶素对照液以及金荞麦供试品溶液各10 μL，注入液相色谱仪，按上述色谱条件测定峰面积。以外标法计算（-)-表儿茶素含量。 |
附件： |
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备注： |
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参考文献： |
何美珊，钱炳辉，王兆龙等. HPLC法测定金荞麦中（-)-表儿茶素含量. 中草药 .2005，36（3)︰441～442 |
