方法名称： |
三黄片—大黄素的测定—高效液相色谱法 |
应用范围： |
本方法采用高效液相色谱法测定三黄片中大黄素的含量。 |
方法原理： |
供试品除去包衣，精密称定，加无水乙醇加热回流1h，滤过，取部分续滤液蒸干，加30%乙醇-盐酸（10:1)加热溶解，立即冷却，用氯仿振摇提取4次，合并氯仿液，置水浴上蒸干，残渣用无水乙醇-醋酸乙酯（2:1)溶解，摇匀，用滤膜滤过，取续滤液进入高效液相色谱仪进行色谱分离，用紫外吸收检测器，于波长254nm处检测大黄素的吸收值，计算出其含量。 |
试剂： |
1. 甲醇（色谱纯) 2. 乙醇 （分析纯) 3. 磷酸（分析纯) |
仪器设备： |
1 仪器 1.1 高效液相色谱仪 1.2 色谱柱 Hypersil C18色谱柱（150mm×4.6mm, 5μm) 1.3 紫外吸收检测器 2 色谱条件 2.1 流动相：甲醇 0.1%磷酸溶液=85 15 2.2 检测波长：254nm 2.3柱温：室温 |
试样制备： |
1. 称取供试品 取样品20片，除去糖衣，精密称定。研细，混匀，取约0.1g，精密称定。 2. 对照品溶液的制备 精密称取大黄素适量，加无水乙醇-醋酸乙酯（2:1)制成每1ml含大黄素0.03mg的溶液。 3.供试品溶液的制备 取供试品锥形瓶中，精密加乙醇30ml，密塞，称定重量，置水浴上加热回流1h，放冷，用乙醇补足减失的重量，滤过，精密量取续滤液15ml，置烧瓶中，水浴蒸干，加30%乙醇-盐酸（10:1)溶液15ml,置水浴上加热溶解1h，立即冷却，用氯仿振摇提取4次，合并氯仿液，置水浴上蒸干，残渣用无水乙醇-醋酸乙酯（2:1)溶解，移置25ml量瓶中，并稀释至刻度，摇匀，用0.45um滤膜滤过，取续滤液为供试品溶液 |
操作步骤： |
1. 标准曲线的绘制 精密量取上述对照品溶液1，2，3，4，5，6ml，分别置25ml容量瓶中,加无水乙醇-醋酸乙酯（2:1)释释至刻度,分别精密吸取10μl注入高效液相色谱仪,测定峰面积,以进样量为横坐标,峰面积为纵坐标,绘制标准曲线。 按供试品测定方法进行测定，进行线性回归得标准曲线。 2. 供试品的测定 精密吸取供试品溶液10μL注入高效液相色谱仪，用紫外吸收检测器，于波长254nm处测定大黄素的吸收值，计算出其含量。 |
参考文献： |
苗明三，李振国.现代实用中药质量控制技术.北京：人民卫生出版社，2000,81 |
