方法名称： |
藿胆丸－鹅去氧胆酸、猪去氧胆酸的测定－薄层扫描法 |
应用范围： |
本方法采用薄层扫描法测定藿胆丸中鹅去氧胆酸、猪去氧胆酸的含量。 本方法适用于中成药藿胆丸。 |
方法原理： |
供试品加入氢氧化钠加热皂化，冷却，离心。取上清液，用浓盐酸调PH值，氯仿萃取，回收氯仿蒸干，残渣用无水乙醇溶解，制成供试液，点样、展开，以5%硫酸乙醇溶液显色，用荧光薄层扫描仪进行扫描，于波长λ＝366nm测量鹅去氧胆酸、猪去氧胆酸吸收度积分值，计算其含量。 |
试剂： |
1. 正己烷 2 .甲醇 3 .醋酸乙酯 4 .醋酸 5 .5％硫酸乙醇 |
仪器设备： |
1 仪器 1.1 定量毛细管 1.2 薄层扫描仪 1.3涂布器 应能使吸附剂在玻璃板上手工或自动涂成一层符合厚度要求的均匀薄层。 1.4点样器 1.5展开室 2材料 2.1玻板 用20cm ×10cm的规格，要求光滑、平整，洗净后不附水珠，晾干。 2.2吸附剂 硅胶G，其颗粒大小一般要求直径为10～40μm。 |
试样制备： |
1, 对照品溶液的制备 分别精密称取鹅去氧胆酸、猪去氧胆酸各1.0mg，置同一5.0mL容量瓶中，以无水乙醇制成各含0.2mg/mL的溶液，作为对照品溶液。 2, 供试品溶液的制备 精密称取供试品粉末（过五号筛-80目)约1g，置三角瓶中，加40％氢氧化钠溶液20mL，加热120℃皂化5小时，冷却，离心，吸取上清液，滤渣水洗3次，每次30mL，合并上清液，加浓盐酸调PH1－2，氯仿萃取5次，每次40mL，合并萃取液，用无水硫酸钠脱水，滤过，滤渣用30mL氯仿洗涤，回收氯仿蒸干，残渣用无水乙醇溶于25mL容量瓶中，加至刻度，摇匀，作为供试品溶液。 注：“精密称取”系指称取重量应准确至所称取重量的千分之一。“精密量取”系指量取体积的准确度应符合国家标准中对该体积移液管的精度要求。 |
操作步骤： |
1.薄层板制备 将吸附剂1份和水3份在研钵中向一方向研磨混合，去除表面的气泡后，倒入涂布器中，在玻板上平稳地移动涂布器进行涂布（厚度为0.25～0.5mm)取下涂好薄层的玻板，于室温下，置水平台上晾干，在反射光及透射光下检视，表面应均匀，平整，无麻点、无气泡、无破损及污染，于110℃烘30分钟，冷却后立即使用或置干燥箱中备用，或用商品预制板。 2.点样 精密吸取供试品溶液适量，分别交叉点于同一硅胶G薄层板上，如用点样器点样到薄层板上，一般为圆点，点样基线距底边1.0～1.5cm，样点直径一般不大于2mm，点间距离可视斑点扩散情况，以不影响检出为宜。点样时必须注意勿损伤薄层表面。 3.展开 将点好样品的薄层板放入展开缸的展开剂中，以正己烷-醋酸乙酯-醋酸-甲醇（20:25:2:3)10℃以下放置12小时的下层溶液为展开剂，展开至8～15cm时，取出薄层板，晾干，喷以5%硫酸乙醇溶液，在100℃烘烤7～8分钟，取出，晾干。 4.含量测定 在薄层板上覆盖同样大小的玻璃板，周围用胶布固定，选择反射方式，采荧光法线性扫描，激发波长λ＝366nm测定鹅去氧胆酸、猪去氧胆酸吸收度积分值与对照品吸收度积分值，计算。 |
参考文献： |
林彤、朱品业. 荧光薄层扫描测定藿胆丸中猪去氧胆酸（HDCA)和鹅去氧胆酸（CDCA)的含量. 广东药学，1994，(4)：19-20. |
