方法名称： |
黄连上清丸—盐酸小檗碱的测定—高效液相色谱法 2 |
应用范围： |
本方法适用于中成药黄连上清丸。 |
方法原理： |
将供试品加稀盐酸，超声处理，加稀盐酸定容，作为供试品溶液。精密吸取对照品溶液和供试品溶液，分别注入高效液相色谱仪，用紫外吸收检测器，于波长260nm处检测大黄酸吸收值，以外标法计算含量。 |
试剂： |
1. 甲醇（色谱纯) 2. 磷酸 3. 稀盐酸 |
仪器设备： |
1 仪器 1.1 高效液相色谱仪 1.2 色谱柱 Hypersil C18 柱 (150 × 4.6mm，5µm)。 1.3 紫外吸收检测器 2 色谱条件 2.1 流动相：甲醇 水 磷酸 = 48 52 0.5 2.2 流速：1.0mL/min 2.3 检测波长：260nm 2.4 柱温：室温 |
试样制备： |
1. 称取供试品 精密称取本品粉末0.5g。 2. 对照品溶液的制备 精密称取盐酸小檗碱适量，加1％盐酸溶液稀释成每1mL含0.5mg盐酸小檗碱的溶液，作为对照品储备液。精密量取对照品储备液2mL，置100mL容量瓶中，加1％盐酸稀释成每1mL含10µg盐酸小檗碱的溶液，作为对照品溶液。 3. 标准溶液的配制 精密量取对照品储备液，稀释成盐酸小檗碱浓度各为5、10、15、20、25µg/mL的溶液，滤过，作为绘制标准曲线的系列浓度标准溶液。 4. 供试品溶液的制备 将供试品置100mL容量瓶中，加1％盐酸溶液适量，超声处理，用1％盐酸溶液定容，摇匀，滤过，作为供试品溶液。 注：“精密称取”系指称取重量应准确至所取重量的千分之一。“精密量取”系指量取体积的准确度应符合国家标准中对该体积移液管的精度要求。 |
操作步骤： |
1. 标准曲线的绘制 精密吸取上述标准溶液10µL，注入高效液相色谱仪，用紫外吸收检测器，于波长260nm处测定小檗碱的吸收值，以对照品溶液浓度对峰面积绘制标准曲线，进行线性回归，得到回归方程。 2. 供试品的测定 精密吸取对照品溶液和供试品液各10µL，分别注入高效液相色谱仪，用紫外吸收检测器，于波长260nm处测定小檗碱的吸收值，以外标法计算出其含量。 |
参考文献： |
林建阳，关军. 高效液相色谱法测定黄连上清丸中盐酸小檗碱的含量. 中国民族医药杂志，2002，20(4)：544. |
