香连丸—小檗碱和巴马亭的测定—薄层扫描法

本方法采用薄层-导数荧光分光光度法测定小檗碱和巴马亭的含量。

本方法适用于中成药香连丸的测定。

供试品置索氏提取器中加乙醇提取至无色并定容到一定体积。提取液于硅胶G板上点样，并刮斑于具塞离心玻璃管中，经处理后取上清液于荧光计上测定，小檗碱的λ_EX(nm)：355； λ_Em(nm)：509，513，560，564。巴马亭的λ_EX(nm)：344； λ_Em(nm)：495，499，565，569。计算含量。

1. 正丁醇，冰醋酸，水，三乙胺

2. 乙醇

1仪器

1.1多功能荧光计

1.2紫外分析仪

1.3索氏提取器

2材料

2.1玻板

用10cm×10cm、10cm×15cm、20cm×10cm或20cm×20cm的规格，要求光滑、平整，洗净后不附水珠，晾干。

2.2吸附剂

硅胶G其颗粒大小一般要求直径为10～40μm。

1.供试品溶液的制备

香连丸、木香、黄连粉碎，恒重，并同时炮制制黄连。精称上述药品，置索氏提取器中，90%乙醇提取至无色，并定容到5mL备用。

2.对照品溶液的制备

精密吸取小檗碱标准乙醇液（1.0mg/mL)，巴马亭标准乙醇液（1.0mg/mL)点板，展开，定斑，刮斑于具塞离心试管中，加无水乙醇5mL，超声振荡2h，离心15min，得上清液作为对照品溶液。

注1：“精密称取”系指称取重量应准确至所称取重量的千分之一，“精密量取”系指量取体积的准确度应符合国家标准中对该体积移液管的精度要求。

注2：“水分测定“用烘干法。取供试品2-5g，平铺于干燥至恒重的扁形称量瓶中，厚度不超过5mm，疏松样品不超过10mm，精密称定，打开瓶盖在100-105℃干燥5小时，将瓶盖盖好，移至干燥器中，冷却30分钟，精密称定重量，再在上述温度干燥1小时，冷却，称重，至连续两次称重的差异不超过5mg为止根据减失的重量，计算供试品中含有水分的百分数。

1.薄层板制备

将吸附剂1份和水3份在研钵中向一方向研磨混合，去除表面的气泡后，倒入涂布器中，在玻板上平稳地移动涂布器进行涂布（厚度为0.25～0.5mm)取下涂好薄层的玻板，于室温下，置水平台上晾干，在反射光及透射光下检视，表面应均匀，平整，无麻点、无气泡、无破损及污染，于110℃烘30分钟，冷却后立即使用或置干燥箱中备用，或用商品预制板。

2.薄层板的处理

正丁醇每升用2gNaOH、1gAgNO₃回流重蒸，冰醋酸重蒸处理，水为重蒸水。用上述处理过的正丁醇-冰醋酸-水（7：1：2)跑空板（未点样的薄层板)；跑到顶端后取出晾干，105℃活化30min。

3.点样

3.1对照品点样 （没有具体量)

精密吸取对照品溶液，分别点于同一硅胶G薄层板上，如用点样器点样到薄层板上，一般为圆点，点样基线距底边1.0～1.5cm，样点直径一般不大于2mm，点间距离可视斑点扩散情况，以不影响检出为宜。点样时必须注意勿损伤薄层表面。

3.2供试品点样

精密吸取供试品溶液和对照品溶液，分别点于同一硅胶G薄层板上，如用点样器点样到薄层板上，一般为圆点，点样基线距底边1.0～1.5cm，样点直径一般不大于2mm，点间距离可视斑点扩散情况，以不影响检出为宜。点样时必须注意勿损伤薄层表面。

4展开

将点好样品的薄层板放入展开缸的展开剂中，以正丁醇-冰醋酸-水-三乙胺（7：1：2：1)展开，展开至8～15cm时，取出薄层板，晾干，在2537A紫外分析仪上观察荧光。

5含量测定

5.1标准曲线绘制

将对照品的硅胶G板，展开后的斑点，刮于具塞离心玻璃管中，取经处理后上清液于荧光计上测定，小檗碱的λ_EX(nm)：355； λ_Em(nm)：509，513，560，564。巴马亭的λ_EX(nm)：344； λ_Em(nm)：495，499，565，569。以对照品浓度为横坐标，荧光强度为纵坐标分别绘制标准曲线。

5.2供试品的测定

将供试品的硅胶G板，展开后的斑点，刮于具塞离心玻璃管中，取经处理后上清液于荧光计上测定，小檗碱的λ_EX(nm)：355； λ_Em(nm)：509，513，560，564。巴马亭的λ_EX(nm)：344； λ_Em(nm)：495，499，565，569，计算含量。

注：分光光度法应以配制供试品的同批溶剂为对照，采用1cm的石英吸收池。以吸收度最大的波长作为测定波长，一般供试品的吸收度读数，以在0.3-0.7之间的误差较小。仪器的狭缝波带宽度应小于供试品吸收带的半宽度，否则测得的吸收度偏低。狭缝宽度的选择，应以减少狭缝宽度时供试品的吸收度不再增加为准。由于吸收池和溶剂本身可能有空白吸收，因此测定供试品的吸收度后应减去空白读数，再计算含量。

陶美英，赵金慧. 薄层-导数荧光分光光度法测定香连丸、左金丸中小檗碱、巴马亭的含量. 中草药，1997，28（5)：278-280