洋地黄毒苷的测定—分光光度法

本方法采用分光光度法测定洋地黄毒苷（C₄₁H₆₄O₁₃)的含量。

本方法适用于洋地黄毒苷。

取本品适量，经过自装填料为硅藻土的色谱柱分离后，收集部分经纯化，加入新制的碱性三硝基苯酚试液，摇匀，在22-25℃的暗处放置30分钟，照紫外-可见分光光度法，立即在485nm波长处，测定吸光度，计算，即得。

1. 乙醇

2. 碱性三硝基苯酚

3. 三氯甲烷

4. 苯

1. 可见分光光度计

2. 自制色谱柱

取长约200mm，内径约25mm、下端具有活塞的色谱管，底部填少许脱脂棉，取处理过的硅藻土（取色谱用的硅藻土150g，加稀盐酸1000mL，煮沸10分钟，放冷，滤过，用水洗涤至洗液遇pH试纸显中性，在105℃干燥后，再在500℃炽灼2小时，放冷)2g，加水1mL，充分混合，分次装入色谱管内，每次均用平头玻璃棒轻压使平；另取处理过的硅藻土3g，加甲酰胺2mL与水1mL，充分混匀，同法装柱，上覆一小块脱脂棉，轻压使平。

供试品溶液的制备

精密称取本品10mg，置50mL量瓶中，加三氯甲烷10mL溶解后，加苯（同上法处理)稀释至刻度，摇匀，精密量取10mL，加入色谱注中，以苯（同上法处理)-三氯甲烷（3：1)洗脱，流速为每分钟不超过4mL，收集洗脱液于250mL量瓶中，至近刻度时，另加三氯甲烷稀释至刻度，摇匀作为供试品溶液。

注：“精密称取”系指称取重量应准确至所称取重量的千分之一。“精密量取”系指量取体积的准确度应符合国家标准中对该体积移液管的精度要求。

供试品的测定

精密量取上述洗脱液25mL与对照品溶液5mL，分别置锥形瓶中，在水浴上蒸干，残渣中各加乙醇0.5mL，蒸干，放冷至室温精密加入70%乙醇5mL，密塞，在22-25℃放置15分钟，并时时振摇，在精密加新制的碱性三硝基苯酚试液3mL，摇匀，在22-25℃的暗处放置30分钟，照紫外-可见分光光度法，在485nm波长处，依法测定吸光度，计算，即得。