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他汀类药物是3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A（HMG－CoA)还原酶抑制剂，HMG－CoA还原酶是胆固醇合成酶系中的限速酶，通过对此酶的抑制，此类药物可阻断细胞内甲羟戊酸代谢途径，竞争性抑制胆固醇的生物合成，使细胞内胆固醇减少等，从而发挥其降血脂作用。近年来发现他汀类药物还具有不依赖于其降脂效果的多样性的保护作用,包括抗氧化应激作用[4,5]。本文旨在探讨辛伐他汀对高糖诱导下牛视网膜血管内皮细胞(retinal bovine retinal endothelial cell,BREC) 血管内皮生长因子（vascμlar endothelial growth factor, VEGF)和血管生成素-2（Angiopoietin-2, Ang-2)表达的作用，并阐明其作用机制。
2.5 Western blotBRECs加入悬浮裂解液和蛋白酶抑制
剂直接提取蛋白质。检测蛋白质浓度 (Bio-Rad Protein Assay, Bio-Rad Laboratories, Hercules, CA, USA),各样本稀释成统一浓度,进行10%聚丙烯酰胺凝胶电泳,电泳后转移到硝酸纤维素膜上,5％脱脂牛奶TBST（0.05% Tween-20)封闭， 分别用1:1 000 稀释的Ang-2 多克隆抗体(R&D Systems, Inc.)、VEGF单克隆抗体(Chemicon, Temecula, CA)和1:250 PAR 单克隆抗体(Alexis, San Diego, CA)4℃孵育过夜,洗膜后用1∶5 000稀释的二抗- 辣根过氧化酶(HRP)交联物孵育,发光 (Super Signal CL-HRP Substrate System; Pierce, Rockford, IL), X光片于室温下自显影,使用凝胶分析系统(Gel Doc 1000, Bio-Rad, Hercules, CA)摄像并分析。β-actin表达作为内参(1:5,000; monoclonal anti-β-actin; Sigma Chemical Co. product A 5441)。试验重复3次，结果取平均值。
2.6 统计学分析结果
使用平均值±SD表示，使用SPSS13.0软件，运用ANOVA进行多组间变量分析比较， Pearson检验进行相关关系分析，P值小于0.05有统计学差异。
3 结果
3.1 BRECs PARP活性、VEGF和Ang-2表达同对照组比较，高糖孵育BRECs 72 h，PARP活性增强，VEGF和Ang-2蛋白表达显着图1 各组BRECs PAR化PARP、Ang-2、VEGF蛋白表达并定量.
**P < 0.01 比 NG, *P < 0.05 比 HG.
性增加（p＜0.01)；辛伐他汀治疗后则显着性降低这些变化（p＜0.05)。进一步研究发现，辛伐他汀显着性抑制高糖诱导的VEGF、Ang-2的作用类似于PARP抑制剂PJ-34)。如果高糖联合辛伐他汀和甲羟戊酸孵育细胞，辛伐他汀的这种抑制作用被逆转。此外，本研究还发现，当ROS清除剂NAC联合高糖孵育细胞可防止PARP激活（PAR化蛋白表达水平代表PARP活性程度)。
3.2 ROS水平与对照组比较，高糖孵育BRECs 24 h，可诱导ROS生成显着性增加，而甘露醇对细胞ROS的生成无明显作用(图3)。当0.01, 0.1, 1.0, 5.0 and 10μM辛伐他汀分别联合高糖培养BRECs，结果显示，ROS生成减少，浓度为0.01μM时有显着性差异（p＜0.05)；浓度0.1μM以上时有非常显着性差异（p＜0.01)，且在浓度为5.0μM时，这种抑制作用最强。所以本研究选择5.0μM作为辛伐他汀相关干预实验的作用浓度。如果高糖联合辛伐他汀（5.0μM)及甲羟戊酸或GGPP孵育细胞，辛伐他汀对ROS生成的抑制作用被逆转(图3)。另外，结果还显示，NADPH氧化酶抑制剂DPI可显着抑制高糖孵育的细胞ROS生成。医学.全在线www.med126.com
3.3 NADPH氧化酶活性和线粒体膜电位水平同对照组比较，高糖孵育BRECs 24 h， NADPH氧化酶活性显着性增加（p＜0.01)，辛伐他汀治疗后则显着性降低（p＜0.05)。高糖孵育BRECs线粒体膜电位水平与对照组比较显着性升高（p＜0.01)，辛伐他汀治疗后则显着性减少（p＜0.05)，且这种膜电位水平与ROS水平呈显着性正相关（图4B和C)。
