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猪源支气管败血波氏杆菌的分离鉴定
猪源支气管败血波氏杆菌(Bordetella bronchiseptica，Bb)是猪传染性萎缩性鼻炎(Swine infectious atrophicrhinitis of Swine，简称AR)的主要病原菌，单独或与产毒素多杀性巴氏杆菌混合感染可引起猪的非进行性及进行性萎缩性鼻炎。该病在世界范围内存在，给养猪业造成巨大的经济损失。
1、病原特征
支气管败血波氏杆菌属于波氏杆菌属细菌，是一种无芽孢、单在或成对排列的革兰氏阴性球状杆菌，常呈两极着色，其大小为0．2～0．3μm×0．5～1．0μm。同时是一种严格需氧、非氧化非发酵型细菌。根据毒力、生长特性和抗原性，该菌可分为3个菌相，I相菌的病原性最强，有荚膜和密集周生菌毛。本文来源于猪场动力网www.powerpigs.net。II相菌和III相菌无荚膜和菌毛，毒力较弱。在实验传代过程中，细菌易发生菌相变异，由I相菌变成II相菌和III相菌，II相菌是I相菌和III相菌之间的过渡菌型。
Bb固着在鼻腔黏膜上皮细胞上增殖，其坏死毒素引起鼻腔上皮发炎医.学全.在.线网站www.med126.com、增生和退变导致黏膜受损，给产毒素多杀性巴氏杆菌(toxigenic Pasteurella multocida，TPm)寄居和增殖创造了条件。除引起猪鼻甲骨萎缩外，还可引起猪的支气管性肺炎。Bb除感染猪外，还可感染家兔、豚鼠、马、大鼠、狗、猫等多种哺乳动物，偶尔感染人，引起慢性呼吸系统疾病或支气管肺炎。
2 、Bb的分离鉴定
Bb的分离及鉴定方法包括病原学方法、血清学方法和分子生物学方法3种。虽然细菌分离鉴定是病原学方法中最基础、最传统的方法，由于鼻腔中其他常在菌的干扰，同时该菌在培养过程中容易发生菌相变异，实际工作中Bb的分离培养十分困难。
2．1病原学方法
2．1．1 Bb的分离培养
对表现萎缩性鼻炎临床症状的猪，消毒猪鼻盘后，用棉拭子采集猪鼻腔内黏性分泌物，将棉试子样本保存在4～8℃的非营养性转运培养基中。对剖检发现有肺部病变的猪，无菌取肺组织样本，保存在4～8℃条件下尽快转运至实验室。Bb在各种普通培养基中均易生长，如常用的商业化培养基胰蛋白酶大豆琼脂(tryptic soy agar，TSA)、麦康凯琼脂、鲍一姜(Bordet-Gengou)氏培养基等，但容易发生菌相变异。通常用来培养I相菌的条件为：在鲍一姜氏基础培养基中加入5％～l0％的血液或裂解红血球液及优质混合蛋白胨，并在无凝集水的潮湿空气中37℃培养24～48 h。典型的Bb I相菌呈圆形、高度凸起、光滑、直径小于l mm、半透明、边缘整齐，强黏性的菌落，而菌相变异菌呈扁平或低凸起、粗糙、直径大于1 mm、透明、边缘不整齐，无或弱黏性的菌落；在鲜血琼脂培养基上I相菌呈0溶血，而菌相变异菌呈y溶血。同时，Bb I相菌在1％葡萄糖改良麦康凯平板菌落不变红，可生长出一种圆形光滑、闪光隆起、透明略呈茶色或茶黄色的菌落。但该方法的优点是操作简便缺点是培养基营养丰富，无抗菌剂，易受常在菌污染。
苏雄等利用自行设计的双层平板选择培养基并用双温培养法分离猪Bb。用加有l％葡萄糖的麦康凯琼脂作为基础培养基，病料接种后在37℃培养一段时间，再在该培养过的基础平板上倾注一层半固体培养基，置25℃培养14～16 h，其后在培养基表面挑选单个的菌落进行验证。该方法的优点是能抑制其他污染杂菌和真菌的生长，不需要抗菌剂，但培养基配置和培养繁琐，在临床上很难推广。
杨佩琼比较了改良Smith培养基、l％葡萄糖麦康凯培养基和呋喃西林麦康凯培养基对Bb作分离效果，发现改良的Smith培养基的分离培养效果最理想，能很好地抑制鼻腔中其他细菌的生长，并使培养基pH改变导致颜色变化，出现浅蓝绿色、边缘有光泽、易于识别的菌落。
