| 公开(公告)号 | CN100363500C |
| 公开(公告)日 | 2008.01.23 |
| 申请(专利)号 | CN200410027943.X |
| 申请日期 | 2004.07.07 |
| 专利名称 | 重组人粒细胞集落刺激因子的制备方法 |
| 主分类号 | C12P21/02(2006.01)I |
| 分类号 | C12P21/02(2006.01)I;C12N1/20(2006.01)I;C07K14/525(2006.01)I;C07K1/34(2006.01)I |
| 分案原申请号 | |
| 优先权 | |
| 申请(专利权)人 | 深圳新鹏生物工程有限公司 |
| 发明(设计)人 | 李政海;胡家华;李继东 |
| 地址 | 518057广东省深圳市南山区高新技术园北区郎山二路 |
| 颁证日 | |
| 国际申请 | |
| 进入国家日期 | |
| 专利代理机构 | 深圳市博锐专利事务所 |
| 代理人 | 张 明 |
| 国省代码 | 广东;44 |
| 主权项 | 一种重组人粒细胞集落刺激因子的制备方法，包括以下步骤： a.选用工程菌DH5α-PBV220-hGCSF菌株进行发酵培养； b.对发酵培养所得菌体进行包涵体的分离和洗涤，得到精制包涵体； c.对精制包涵体进行变性处理，得到变性所得物； d.将变性所得物以13000r/min离心40min，弃去沉淀，将上清缓慢倒入复性液中，控制蛋白浓度在0.05mg/ml，搅拌至少20小时，即为第一次复性所得物；所述复性液的配方为：1mol/L尿素，0.1mmol/l还原型谷胱甘肽，0.01mmol/l氧化型谷胱甘肽，30mmol/l三羟甲基氨基甲烷-盐酸，pH8.5； e.选择超滤膜截留分子量10KDa，将第一次复性所得物超滤浓缩，终体积为原体积的1/15，即为超滤所得物； f.将超滤所得物放置于2-8℃环境，至少96小时，即得第二次复性所得物； g.对第二次复性所得物进行层析处理，得到重组人粒细胞集落刺激因子。 |
| 摘要 | 一种重组人粒细胞集落刺激因子的制备方法，包括步骤：a.选用工程菌DH5α-PBV220-hGCSF菌株进行发酵培养；b.对发酵培养所得菌体进行包涵体的分离和洗涤，得到精制包涵体；c.对精制包涵体进行变性处理，得到变性所得物；d.对变性所得物进行第一次复性处理，得到第一次复性所得物；e.对第一次复性所得物进行超滤处理，得到超滤所得物；f.对超滤所得物进行进行第二次复性处理，得到第二次复性所得物；g.对第二次复性所得物进行层析处理，得到重组人粒细胞集落刺激因子，其纯度达到98％以上、比活性不低于4.0×108IU/mg。本制备方法为解决人粒细胞集落刺激因子制备上存在的表达率偏低、菌体产量偏低、包涵体复性率偏低、活性偏低以及成本偏高等问题提供了可能。 |
| 国际公布 |
