| 公开(公告)号 | CN1504483A |
| 公开(公告)日 | 2004.06.16 |
| 申请(专利)号 | CN02134191.5 |
| 申请日期 | 2002.11.29 |
| 专利名称 | 一种NF-κB抑制物及其制备方法、以及作为抗肿瘤药物的应用 |
| 主分类号 | C07K14/435 |
| 分类号 | C07K14/435;C12N15/12;C12N15/861;C12P19/34;C12P21/02;A61K38/16;A61P35/00 |
| 分案原申请号 | |
| 优先权 | |
| 申请(专利权)人 | 重庆医科大学 |
| 发明(设计)人 | 黄爱龙;刘冰熔;向明确;唐霓 |
| 地址 | 400010重庆市渝中区医学院路1号 |
| 颁证日 | |
| 国际申请 | |
| 进入国家日期 | |
| 专利代理机构 | |
| 代理人 | |
| 国省代码 | 重庆;85 |
| 主权项 | 制备一种NF-κB抑制物(IκBαM超级抑制物)，其特征在于：本发明在克隆IκBα基因的cDNA时采用特异的RT-PCR引物和两对诱变引物；将IκBα基因的第32和36位编码丝氨酸的密码子分别进行定向诱变，序列分析表明第95和106位核苷酸分别按设计由G变为T、由T变为G，即32位和36位编码丝氨酸的密码子分别定向诱变为编码异亮氨酸和丙氨酸的密码子，其余序列与GeneBank中的IκBα基因序列一致，结果表明构建成功了NF-κB的超抑制物IκBαM。 |
| 摘要 | 一种NF-κB抑制物及其制备方法、以及作为抗肿瘤药物的应用。本发明设计两对诱变引物和一对RT-PCR引物，运用分子生物学相关技术，采用体外定点突变法分两次将第32和36位编码丝氨酸的密码子分别进行定向诱变，构建了IκBαM超级抑制物，将超级抑制物IκBαM从pGEM-T载体亚克隆到pAdTrack-CMV穿梭载体中，然后与AdEasy-1 System系统的腺病毒骨架质粒在大肠杆菌BJ5183中进行同源重组，线性化后转入293细胞进行包装、扩增以得到完整的重组腺病毒。然后在原核及真核细胞(包括293、HepG2、HeLa、HUVEC、MAD-435S等细胞)中表达，得到的蛋白(表达的NF-κB的超级抑制物IκBαM)经Western blot、免疫组化等方法检测，结果表明此抑制物能稳定、高效、持续表达；同时，在进一步的体外实验研究中，联合TNF-α作用，初步显示了其抑制NF-κB的异常活化并抑制肿瘤细胞生长的效果。 |
| 国际公布 |
