| 公开(公告)号 | CN1526731A |
| 公开(公告)日 | 2004.09.08 |
| 申请(专利)号 | CN03158278.8 |
| 申请日期 | 2003.09.22 |
| 专利名称 | 重组人红细胞生成素的分离纯化工艺 |
| 主分类号 | C07K14/505 |
| 分类号 | C07K14/505;C07K1/36 |
| 分案原申请号 | |
| 优先权 | |
| 申请(专利权)人 | 南京师范大学 |
| 发明(设计)人 | 胡云龙;张双全 |
| 地址 | 210097江苏省南京市宁海路122号 |
| 颁证日 | |
| 国际申请 | |
| 进入国家日期 | |
| 专利代理机构 | 南京知识律师事务所 |
| 代理人 | 栗仲平;王东升 |
| 国省代码 | 江苏;32 |
| 主权项 | 一种重组人红细胞生成素的分离纯化工艺，包括以下步骤：Blue sepharose.F.F层析：用PB缓冲液平衡Blue sepharose.F.F层析柱，用经过微米膜过滤后细胞培养上清上样，用PB缓冲液冲洗层析柱至基线，用20mM PB+0.75M NaCL缓冲液洗脱；金属螯合亲和柱层析用0.1M EDTA-Na2+1M NaCl平衡4.0C.V，用50％异丙醇+1％TFA平衡3.0C.V，用0.1M NaAc.HAC+0.2M CuSO4.5H2O平衡3.0C.V，用20mM PB+0.5M NaCl平衡3.0C.V，用Blue-Sepharose.F.F层析柱收集的洗脱蛋白峰上样用20mM PB+0.5M NaCl冲洗，收集穿透液；Sephadex G-25(Medium)柱层析(7.5×70cm)用注射用水冲洗3.0C.V，用20mMTris-HCl(PH7.0)缓冲液平衡层析柱3.0C.V，用金属螯合亲和层析柱收集的穿透液上样，用20mMTris-HCl(PH7.0)缓冲液洗脱，收集洗脱蛋白峰；Source Q柱层析(2.6×10cm)用20mMTris-HCl缓冲液平衡4.0C.V，用Sephadex G-25柱层析收集的洗脱蛋白峰上样，用50mM NaCl/20mMTris-HCl缓冲液进行洗脱杂蛋白，用150mM NaCl/20mMTris-HCl缓冲液进行洗脱目的蛋白峰，收集目的蛋白峰经过0.22微米膜过滤。 |
| 摘要 | 重组人红细胞生成素的分离纯化工艺，包括以下步骤：Blue sepharose.F.F层析；2.金属螯合亲和柱层析；3.Sephadex G-25柱层析；4.Source Q柱层析，收集目的蛋白峰经过0.22微米膜过滤。本发明是一种低成本的重组人红细胞生成素的生产方法。本工艺中不使用反相层析和有机溶剂，避免蛋白质在层析过程中发生变性和有机溶剂的残留。本工艺采用Blue Sepharose.FastFlow金属螯和亲和层析，Sephadex G-25层析和Source Q层析顺序组合纯化工艺路线，可以大规模制备药用级的rHuEPO蛋白。 |
| 国际公布 |
