| 公开(公告)号 | CN1171899C |
| 公开(公告)日 | 2004.10.20 |
| 申请(专利)号 | CN02100558.3 |
| 申请日期 | 2002.02.05 |
| 专利名称 | 一种新型纤溶酶原激活剂(TPA)突变体的结构与用途 |
| 主分类号 | C07H21/00 |
| 分类号 | C07H21/00;C07K14/00;C12N15/64;A61K38/16;A61P9/10 |
| 分案原申请号 | |
| 优先权 | |
| 申请(专利权)人 | 中国人民解放军空军总医院 |
| 发明(设计)人 | 朱美财;李文;占志;王荫静 |
| 地址 | 100036 北京市阜成路30号 |
| 颁证日 | |
| 国际申请 | |
| 进入国家日期 | |
| 专利代理机构 | |
| 代理人 | |
| 国省代码 | 北京;11 |
| 主权项 | TPA突变体的核苷酸序列(5’-3’)：1 atgtcttaccaaggaaacagtgactgctactttgggaatgggtcagcctaccgtggcacg 6061 cacagcctcaccgagtcgggtgcctcctgcctcccgtggaattccatgatcctgataggc 120121 aaggtttacacagcacagaaccccagtgcccaggcactgggcctgggcaaacataattac 180181 tgccggaatcctgatggggatgccaagccctggtgccacgtgctgaagaaccgcaggctg 240 |
| 摘要 | 本发明是根据TPA的结构特点，在将TPA分子中指状区和Kringlel区去掉的基础上，将TPA分子中PAI-1结合位点氨基酸进行突变，构建具有TPA活性且其活性不被PAI-1抑制的新一代TPA突变体。主要内容是扩增出天然TPA氨基酸1-3和176-527的DNA序列。将TPA DNA中PAI-1结合位点，核苷酸序列373-384的AAG CAC AGG AGG改变为GCG GCC GCG GCG，使相应的氨基酸KHRR突变为AAAA，构建了新的TPA突变体，并克隆于大肠杆菌表达载体。在大肠杆菌中得到高效表达。表达蛋白占总菌体蛋白的30％，以包涵体形式存在。经蛋白质复性，得到了有活性的TPA突变体。将新的TPA突变体，克隆于比赤酵母分泌型表达载体，在培养上清中得到高活性的TPA突变体。在大肠杆菌和比赤酵母表达的新的TPA突变体与PAI-1反应后TPA活性无抑制。说明核苷酸序列373-384和其相对应的氨基酸序列影响PAI-1结合活性，而不影响其纤溶酶原水解活性。故本发明涉及针对一种新型TPA突变体的核苷酸序列和结构及其成为治疗活性好、用量少的治疗心肌梗塞和脑血栓等血栓性疾病的新型生物工程药物。 |
| 国际公布 |
