公开(公告)号 | CN1181207C |
公开(公告)日 | 2004.12.22 |
申请(专利)号 | CN01124108.X |
申请日期 | 2001.08.13 |
专利名称 | 细胞培养生产新疆雪莲总黄酮的方法 |
主分类号 | C12P17/06 |
分类号 | C12P17/06;C12N5/04;A01H4/00 |
分案原申请号 | |
优先权 | |
申请(专利权)人 | 沈阳联美植物细胞工程有限公司 |
发明(设计)人 | 贾景明;张剑侠;吴立军 |
地址 | 110179 辽宁省沈阳市浑南高新技术产业开发区21世纪大厦1709房间 |
颁证日 | |
国际申请 | |
进入国家日期 | |
专利代理机构 | 北京太兆天元知识产权代理有限责任公司 |
代理人 | 张韬 |
国省代码 | 辽宁;21 |
主权项 | 一种新疆雪莲总黄酮的制备方法,其特征在于该方法为:以新疆雪莲高产细胞株作为种子,种子的保藏号是CGMCC 0610,采用气升式细胞反应器作种子罐,培养10-15天,培养条件为:温度22-26℃,光照时间为8小时/天,光照强度800-2000LX;以气升式细胞反应器作为生产罐;培养条件为培养温度24±1℃,光照8h/d,光照强度1000LX,培养时间10-15天;其培养基采用MS培养基,并添加萘乙酸0-3.5mg/L,6-苄基嘌呤0-3.0mg/L,蔗糖1.5-2.5%,并调PH值4.5-7.5;细胞培养液下罐后,将雪莲培养品60℃减压干燥至恒重,研磨成粉,取粉末1.0重量份,置100体积份容器,加100体积甲醇,即其中称取的雪莲培养品与所用甲醇的配比是1.0克雪莲粉:100毫升甲醇,放置24小时,超声萃取40分钟,滤过,回收甲醇,残渣加适量水3~5体积份使溶解,难溶部分超声溶解,放冷;通过60~85目、10g、内径1cm、长度15cm的聚酰胺层析柱,湿法装柱;以水50体积份洗脱,弃去水液,再用50%乙醇100体积份洗脱,收集洗脱液,并定容至100体积份,摇匀,过0.45μm微孔滤膜,弃去初滤液,取续滤液,上色谱柱,以40∶60∶1.0的甲醇∶水∶冰醋酸为流动相;检测波长257nm,流量1.0ml/min,灵敏度0.02AUFS,柱温室温,进样量10μl,进行分离,收集获得总黄酮晶体。 |
摘要 | 本发明提供了一种采用气升式生物反应器大规模培养新疆雪莲,从培养液中分离提取新疆雪莲总黄酮的方法。该方法是在MS培养基上培养发酵的种子,再将种子转移到20L生物反应器中进行大规模培养。然后对反应器中的培养液进行分离、纯化获取新疆雪莲总黄酮7.1%,纯度99%本发明方法生产成本低,不污染环境,达到了产业化水平。 |
国际公布 |