公开(公告)号 | CN1570147A |
公开(公告)日 | 2005.01.26 |
申请(专利)号 | CN200410024074.5 |
申请日期 | 2004.05.08 |
专利名称 | 单个核细胞白细胞相容性抗原A和B特异核糖核酸检测方法 |
主分类号 | C12Q1/68 |
分类号 | C12Q1/68 |
分案原申请号 | |
优先权 | |
申请(专利权)人 | 山东大学齐鲁医院 |
发明(设计)人 | 邹雄;张义;杨晓静 |
地址 | 250012山东省济南市历下区文化西路107号 |
颁证日 | |
国际申请 | |
进入国家日期 | |
专利代理机构 | 山东济南齐鲁科技专利事务所有限公司 |
代理人 | 宋永丽 |
国省代码 | 山东;37 |
主权项 | 单个核细胞白细胞相容性抗原A和B特异核糖核酸检测方法,首先抽取外周血,提取淋巴细胞(PBL),然后对淋巴细胞总RNA进行鉴定,当可见5s,18s,28s,三条清晰条带时,可用于逆转录聚合酶链反应,其特征在于:使逆转录聚合酶链反应体系为25ul,其中逆转录酶1ul,随机引物1ul,Taq酶0.2ul,上下游引物各是0.4ul,其中HLA-B和HLA-A引物均是4对,使用其中任何一对均可,其中RNA是10ul,得出多聚酶链反应参数是42℃30min,95℃3min,94℃1min,55℃1min,72℃1min,5个循环,94℃10sec,60℃40sec,40个循环,72℃5min,对扩增产物电泳扫描及序列分析,最后进行荧光定量检测,即:以引物为基础合成荧光探针,建立荧光定量逆转录聚合酶链反应,获得检测结果。 |
摘要 | 本发明是单个核细胞白细胞相容性抗原A和B特异核糖核酸检测方法,一、外周血淋巴细胞(PBL)的提取,二、外周血淋巴细胞总RNA的鉴定,三、优化后的聚合酶链反应(PCR)扩增体系,四、扩增产物的电泳扫描及序列分析,五、荧光定量检测。采用本发明检测方法,检测结果是用1-2%琼脂糖凝胶电泳,正常人在287bp处可见明显亮带,免疫力低的人群则明显减弱或缺失,以此结果,可以判断是否是肿瘤患者,若是肿瘤患者筛选生物治疗的药物或治疗方法,可以提高肿瘤患者针对性的治疗效果,对尚未有临床症状的人群,提供应当增强免疫力的警示,对研究人员可以提供寻求提高细胞免疫力的中草药等。本发明可以普遍应用于健康查体。 |
国际公布 |