| 公开(公告)号 | CN1616481A |
| 公开(公告)日 | 2005.05.18 |
| 申请(专利)号 | CN200310106274.0 |
| 申请日期 | 2003.11.13 |
| 专利名称 | 速灭威人工抗原合成方法 |
| 主分类号 | C07K1/02 |
| 分类号 | C07K1/02;C07K14/00;G01N33/53;G01N33/531 |
| 分案原申请号 | |
| 优先权 | |
| 申请(专利权)人 | 南京农业大学 |
| 发明(设计)人 | 刘凤权;张奇 |
| 地址 | 210095江苏省南京市卫岗1号南京农业大学科技处刘凤权 |
| 颁证日 | |
| 国际申请 | |
| 进入国家日期 | |
| 专利代理机构 | |
| 代理人 | |
| 国省代码 | 江苏;32 |
| 主权项 | 速灭威抗原合成方法，包括：1)间-甲基苯甲酰氯的合成：称取双光气28g，小心加入0.135g活性碳，36℃水浴加热，用51.5g甲苯收集光气，甲苯液在23℃水浴中磁力搅拌，尾气通入碱液，光气剧毒，且气味难闻，应在通风橱中进行；至双光气反应完，甲苯相增重16.5g，得24％光气/甲苯溶液，称取间-甲基苯酚7.7g，溶进100ml10％的NaOH水溶液，40℃水浴加热磁力搅拌1小时，冷却到室温后缓慢加入上光气/甲苯溶液，40分钟加完，开始计时，4小时后结束反应；取有机相减压蒸馏得9.012g黄色油状物，GC法测定目标物的含量，5℃冰箱存放备用；2)β-(间-甲基苯甲酰)氨基丙酸(H速)的合成：称取间-甲基苯甲酰氯3.275g，溶进4ml4MNaOH溶液，置5℃冰箱冷却，得A液；称取β-丙胺酸1.989g，溶进4ml4MNaOH溶液，置5℃冰箱冷却，得B液；另取3ml4MNaOH溶液，置5℃冰箱冷却，得C液。将A液与C液均分成5等份，每间隔5～10分钟向B液中同时各加入1份，整个反应置冰水中，磁力搅拌下进行；加样全部完成开始记时，2小时后结束反应。用浓盐酸调节反应终液的pH值为4，目标产物用乙酸乙酯3个50ml份抽提；乙酸乙酯相用稀HCl洗涤数次，用1MNaHCO3溶液2个50ml份抽提；水相再用浓盐酸酸化，乙酸乙酯再抽提；无水Na2SO4干燥，所得物减压蒸馏浓缩至13.8ml，向浓缩液中逐渐加入31ml正己烷，白色结晶物析出，过滤。结晶物经低温干燥得3.898g；再经过甲苯与去离子水5℃下洗涤，低温干燥后称重得到H速结晶物1.871g；3)速灭威人工抗原的合成：称取H速结晶物223mg和NHS130mg，用1000μlDMF溶解于反应装置中；称取300mgDCC，用500μlDMF溶解；将DCC/DMF溶液滴加到上反应装置中，反应在磁力搅拌下室内温度进行7小时；反应终液置5℃冰箱冷却2小时以上，经1.2万rpm离心5分钟，取上清活泼酯液并将其均分为2等份，分别缓慢滴加到2.5ml12mg/ml的BSA溶液与2.5ml12mg/ml的OVA溶液中反应，反应缓冲液为0.2MpH8.0的PB液；反应在磁力搅拌下室内温度进行4小时；将反应液置透析袋内，于0.2MpH6.8的PB中4℃搅拌透析，每4小时换一次透析液，共透析60小时；透析结束后将透析袋中的速灭威人工抗原白色乳状液装于若干1ml离心管中，于-20℃冰箱中存放备用。 |
| 摘要 | 本发明速灭威人工抗原合成技术属于有机化学及免疫学技术范畴。根据有机化学反应的一般原理，合成速灭威半抗原及抗原(包括包被抗原与免疫原)，包括：间-甲基苯甲酰氯的合成，β-(间-甲基苯甲酰)氨基丙酸(H速)的合成，速灭威人工抗原的合成，速灭威人工抗原白色乳状液装于若干1ml离心管中，于-20℃冰箱中存放备用。此抗原具有稳定性好、免疫原性较强等特点。此抗原可制备出高效价、高亲和力的速灭威抗体。抗原制备技术简便可行：抗原的整个制备过程无需要特别的仪器设备，成本低廉，容易工厂化规模生产。 |
| 国际公布 |
