公开(公告)号 | CN1206361C |
公开(公告)日 | 2005.06.15 |
申请(专利)号 | CN99119038.6 |
申请日期 | 1999.09.10 |
专利名称 | 系列通用型腺病毒伴随病毒载体的构建及用途 |
主分类号 | C12N15/861 |
分类号 | C12N15/861;C12N7/01;C12N15/33;C12N15/79;C12N15/65;A61K48/00 |
分案原申请号 | |
优先权 | |
申请(专利权)人 | 本元正阳基因技术股份有限公司 |
发明(设计)人 | 吴小兵;侯云德;伍志坚;曹晖 |
地址 | 100176 北京市北京经济技术开发区永昌中路 6 号 |
颁证日 | |
国际申请 | |
进入国家日期 | |
专利代理机构 | |
代理人 | |
国省代码 | 北京;11 |
主权项 | 保藏编号为CGMCCNO.0415.1的大肠埃希氏菌DH5α/pWAV-1携带的载体质粒pWAV-1,含有2型AAV(AAV-2)基因组两端的ITR,在两个ITR之间依次为巨细胞病毒立早增强子和启动子、多克隆位点和polyA信号,所述的pWAV-1多克隆位点包括NheI,XhoI,PstI和BamHI。 |
摘要 | 本发明涉及一系列通用型腺病毒伴随病毒(adeno-associated virus,AAV)载体的构建,这些载体包括pWAV-1、pWAV-2、pSNAV-1和pSNAV-2。其共同特征是每种载体均提供2型AAV两端的ITR、巨细胞病毒(CMV)立早增强子和启动子、多克隆位点和poly A信号。本发明提供了用上述通用型AAV载体构建携带外源基因的AAV载体质粒的方法。含有外源基因的AAV载体质粒既可用于产生重组AAV,又可直接作为真核表达质粒使用。pSNAV-1和pSNAV-2除具有上述共同特征外,还含有新霉素抗性基因表达盒。本发明利用这一特征,提供了用含有外源基因的pSNAV-1或pSNAV-2质粒建立稳定携带AAV载体的细胞株的方法。本发明进一步提供了“一株载体细胞/一株辅助病毒”的重组AAV生产方法,即用我们先前发明的一种用于重组AAV大规模生产的全功能辅助病毒(已申报专利,申请号98120033.8)感染AAV载体细胞株,实现重组AAV的大规模生产。 |
国际公布 |