| 公开(公告)号 | CN1219795C |
| 公开(公告)日 | 2005.09.21 |
| 申请(专利)号 | CN00111220.1 |
| 申请日期 | 2000.07.19 |
| 专利名称 | 用新的复性方法制备重组人神经生长因子 |
| 主分类号 | C07K14/48 |
| 分类号 | C07K14/48;A61K38/18;A61P25/00 |
| 分案原申请号 | |
| 优先权 | |
| 申请(专利权)人 | 深圳市海王英特龙生物技术股份有限公司 |
| 发明(设计)人 | 王革 |
| 地址 | 518054 广东省深圳市南山区南油大道海王大厦24层 |
| 颁证日 | |
| 国际申请 | |
| 进入国家日期 | |
| 专利代理机构 | 广州市拓元专利事务所 |
| 代理人 | 张少君 |
| 国省代码 | 广东;44 |
| 主权项 | 一种通过二硫键异构酶PDI催化复性制备重组人神经生长因子rhNGF的方法，包括步骤①通过工程菌大肠杆菌表达rhNGF，②进行菌体破碎，③通过离心分离包含体，④利用变性体系变性溶解，⑤PDI催化复性，⑥脱盐以及⑦阳离子交换层析，其特征在于：步骤④的变性体系含有1-10M尿素，5-50mMTris，1-5mMEDTA，且pH7-10；步骤⑤中rhNGF与PDI的摩尔比为100∶1-10∶1；步骤⑦的交换层析采用CM-Sepharose阳离子交换柱，洗脱条件为O-1MNaCl，pH4-8。 |
| 摘要 | 一种通过二硫键异构酶(PDI)催化复性制备重组人神经生长因子(rhNGF)的方法，包括步骤①通过工程菌大肠杆菌表达rhNGF，②进行菌体破碎，③通过离心分离包含体，④利用变性体系变性溶解，变性体系含有1-10M尿素，5-50mM Tris，1-5mM EDTA，且pH 7-10；⑤PDI催化复性，rhNGF与PDI的摩尔比为100∶1-10∶1；⑥脱盐以及⑦阳离子交换层析，采用CM-Sepharose阳离子交换柱，洗脱条件为0-1M NaCl，pH4-8。经上述步骤，即可制备得到纯度大于95％，具天然生物学活性的rhNGF。采用此方法降低了成本，并可应用于工业化生产。 |
| 国际公布 |
