网站首页
医师
药师
护士
卫生资格
高级职称
住院医师
畜牧兽医
医学考研
医学论文
医学会议
考试宝典
网校
论坛
招聘
最新更新
网站地图
您现在的位置: 医学全在线 >> 药学理论 >> 中国药品专利文献 >> 正文:一种抗肿瘤免疫活性细胞-DCIK细胞、其制备方法及应用专利检索:专利号/专利人/发明人
    

一种抗肿瘤免疫活性细胞-DCIK细胞、其制备方法及应用

公开(公告)号 CN1223675C  
公开(公告)日 2005.10.19  
申请(专利)号 CN03115299.6  
申请日期 2003.01.30  
专利名称 一种抗肿瘤免疫活性细胞-DCIK细胞、其制备方法及应用  
主分类号 C12N5/00  
分类号 C12N5/00;C12N5/08;A61K45/00;A61P37/02;A61P35/00  
分案原申请号  
优先权  
申请(专利权)人 中国科学院上海生命科学研究院  
发明(设计)人 徐永华;王恩忠  
地址 200031 上海市岳阳路320号  
颁证日  
国际申请  
进入国家日期  
专利代理机构 上海智信专利代理有限公司  
代理人 肖剑南  
国省代码 上海;31  
主权项 一种DCIK细胞的制备方法,其特征在于包括以下步骤:a、PBMC的制备用生理盐水对倍稀释20~50ml肿瘤病人的抗凝外周血,用比重为1.077的淋巴细胞分离液分离PBMC,分离所用离心机之转头为水平转头,离心速度为2000rpm,离心20~25分钟,然后用Hanks平衡液洗涤PBMC2次,再进行显微镜下细胞计数,最后用淋巴细胞培养液AIM-V调节细胞密度成3~5×106/ml的细胞悬液;b、PBL和粘附细胞的分离将细胞悬液移入6孔板,置37℃、5%CO2饱和湿度培养箱温育2小时,然后用移液管轻轻冲吸细胞,将非粘附PBL悬液收集在离心管中,6孔板中留下的粘附细胞作诱导DC用;c、CIK细胞的诱导和扩增在上述PBL悬液中添加重组人IFN-γ终浓度为1000u/ml,然后移入培养瓶中,置于37℃,5%CO2饱和湿度培养箱中温育24小时,之后,每瓶添加抗人CD3单克隆抗体,IL-1和IL-2,终浓度分别为50ng/ml,100u/ml和500u/ml;或者采用固相CD3单抗刺激的方法,即将全部细胞悬液移入CD3单抗包被过的培养瓶中,再添加IL-1和IL-2,终浓度分别为100u/ml和500u/ml,继续培养48~72小时后显微镜下细胞计数,然后用CIK细胞培养液调节细胞密度为3×105/ml,分配到25cm2培养瓶中,进行扩大培养,此后,每隔48或72小时按上述相同条件扩大培养一次,培养至第8天时收集CIK细胞待用;d、DC诱导和扩增在前述留有粘附细胞的6孔板中加入DC培养液,37℃,5%CO2饱和湿度培养箱培养5天,然后在各孔添加自体瘤细胞裂解液,使裂解液蛋白终浓度为10-50ug/ml,继续培养2~3天后,用移液管冲吸和收集非粘附和半粘附性DC细胞待用;e、DC与CIK细胞共培养制备DCIK细胞培养7~8天的DC和CIK细胞,分别计数,离心弃上清后,分别用CIK培养液调节细胞密度为6×105/ml和2×105/ml,等体积混合后移入培养瓶中,置37℃,5%CO2饱和湿度培养箱培养,每隔48~72小时按4×105/ml的起始细胞密度分瓶扩大培养一次。  
摘要 本发明公开了一种抗肿瘤免疫活性细胞-DCIK细胞、其制备方法及应用,主要是利用细胞因子诱导DC和CIK细胞,然后用肿瘤抗原冲击DC细胞,将经抗原冲击过的DC与CIK细胞按一定比例混合进行共培养,得到一种新的免疫效应细胞群,即DCIK细胞。本发明的DCIK细胞与CIK细胞比较,增殖活性和细胞毒活性更强,且表现对恶性细胞的特异性杀伤。上述DCIK细胞主要用于自体瘤治疗,术后即时施治能有效防转移防复发,也可作化学疗法的辅助治疗,此外,DCIK细胞也可用于某些传染性疾病的免疫治疗。  
国际公布  
...
评论加载中...
网 名: (必填项)
评论内容:
关于我们 - 联系我们 -版权申明 -诚聘英才 - 网站地图 - 医学论坛 - 医学博客 - 网络课程 - 帮助
医学全在线 版权所有© CopyRight 2006-2046, MED126.COM, All Rights Reserved
浙ICP备12017320号-1
百度大联盟认证绿色会员可信网站 中网验证