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采用GS115酵母菌合成重组人肠三叶因子的工艺

公开(公告)号 CN1782067A  
公开(公告)日 2006.06.07  
申请(专利)号 CN200510057295.7  
申请日期 2005.09.27  
专利名称 采用GS115酵母菌合成重组人肠三叶因子的工艺  
主分类号 C12N1/19(2006.01)I  
分类号 C12N1/19(2006.01)I;C12N15/12(2006.01)I;C12N15/81(2006.01)I  
分案原申请号  
优先权  
申请(专利权)人 中国人民解放军第三军医大学第一附属医院  
发明(设计)人 彭 曦;孙 勇;汪仕良;黄跃生  
地址 400038重庆市沙坪坝区高滩岩正街29号  
颁证日  
国际申请  
进入国家日期  
专利代理机构 重庆市恒信专利代理有限公司  
代理人 盛元坤  
国省代码 重庆;85  
主权项 一种采用GS115酵母菌合成重组人肠三叶因子的工艺,包括目的基因的获取、酵母表达载体的构建、酶切及测序鉴定、诱导表达和纯化过程,其特征是在酶切及测序鉴定之后还有一个转化入GS115酵母菌的过程:将重组质粒线性化,然后化学转化入GS115酵母菌,再进行抗性筛选,将筛选出的阳性克隆分别转接到MMH、MDH平板上获得阳性克隆Mut+表型。  
摘要 本发明涉及基因工程的DNA或RNA、载体和质粒,或其分离、制备或纯化。是一种采用GS115酵母菌合成重组人肠三叶因子的工艺:包括目的基因的获取、酵母表达载体的构建、酶切及测序鉴定、转化入GS115酵母菌、诱导表达和纯化六步过程。按照本发明表达方法获得的重组人肠三叶因子,表达产量可达100mg/L,提纯纯度可达95%或更高,纯化的蛋白产物经检测结果表明:用本发明表达方法获得的重组人肠三叶因子为高纯度、无热源、无内毒素,有正确的分子量,与天然的肠三叶因子有相同的等电点、基酸序列和紫外光谱,及其完好的生物学活性的重组蛋白。它在治疗由各种致伤因子引起的肠粘膜损伤等方面具有显著效果。  
国际公布  
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