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新城疫LaSota疫苗株反向遗传操作系统及其应用

公开(公告)号 CN1293195C  
公开(公告)日 2007.01.03  
申请(专利)号 CN200510097997.8  
申请日期 2005.09.02  
专利名称 新城疫LaSota疫苗株反向遗传操作系统及其应用  
主分类号 C12N15/86(2006.01)I  
分类号 C12N15/86(2006.01)I;C12N15/867(2006.01)I;C12N15/85(2006.01)I;C12N7/01(2006.01)I;A61K39/17(2006.01)I;A61P31/14(2006.01)I;C12R1/93(2006.01)N  
分案原申请号  
优先权  
申请(专利权)人 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所  
发明(设计)人 步志高;陈化兰  
地址 150001黑龙江省哈尔滨市市南岗区马端街427号  
颁证日  
国际申请  
进入国家日期  
专利代理机构 中科专利商标代理有限责任公司  
代理人 程金山  
国省代码 黑龙江;23  
主权项 一种制备负链RNA病毒的方法,包括以下步骤: (1)将转录质粒和转录辅助质粒共转染所述病毒复制许可的宿主细胞,培养转染后的宿主细胞; (2)收获上清液,过滤后继续敏感细胞传代或接种鸡胚尿囊腔救获病毒, 其中所述转录质粒是包含外源标签基因GFP的质粒pBRN-FL-GFP3,其核苷酸序列如图10所示, 其中所述辅助质粒包括如下三个质粒:包括编码所述新城疫LaSota弱毒疫苗株的核蛋白(NP)的cDNA序列的质粒、包括编码所述新城疫LaSota弱毒疫苗株的磷酸蛋白(P)的cDNA序列的质粒、和包括编码所述新城疫LaSota弱毒疫苗株的大聚合酶蛋白(L)的cDNA序列的质粒; 其中所述宿主细胞是稳定表达T7聚合酶的细胞系。  
摘要 本发明涉及一种新城疫LaSota弱毒疫苗株的反向遗传操作系统及其应用,该系统包含:转录质粒,该转录质粒包括所述新城疫LaSota弱毒疫苗株的基因组cDNA序列;一个或多个转录辅助质粒,该辅助质粒包括编码所述新城疫LaSota弱毒疫苗株的核蛋白(NP)的cDNA序列、编码所述新城疫LaSota弱毒疫苗株的磷酸蛋白(P)的cDNA序列、和编码所述新城疫LaSota弱毒疫苗株的大聚合酶蛋白(L)的cDNA序列;所述新城疫LaSota弱毒疫苗株的宿主细胞。通过上述反向遗传操作系统,成功救获了野生型病毒株,并且为进一步开展新城疫病毒活载体疫苗研制及NDV病毒相关基础奠定了坚实的基础。  
国际公布  
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