华山参片—总生物碱的测定—分光光度法

本方法采用分光光度法测定华山参片中总生物碱（以莨菪碱计算)的含量。

本方法适用于中成药华山参片。

供试品片粉用枸橼酸-磷酸氢二钠缓冲液振摇定量提取，取续滤液一定量与溴甲酚绿反应后，用氯仿提取数次，合并氯仿并定容。氯仿置紫外可见分光光度计, 于波长415nm处测定吸收度，以莨菪碱（C₁₇H₂₃NO₃)计算总生物碱含量。

1. 枸橼酸-磷酸氢二钠缓冲液（pH4.0)

2. 氯仿

3. 0.04%溴甲酚绿：用枸橼酸-磷酸氢二钠缓冲液（pH4.0)溶液配制。

1. 紫外-可见分光光度计

2 .分液漏斗

1. 对照品溶液的制备

精密称取在120℃干燥至恒重的硫酸阿托品，加水制成每1mL相当于含莨菪碱7μg的溶液。

2. 供试品溶液的制备

取供试品40片，除去糖衣，精密称定，研细，精密称取适量（约相当12片的重量)，置具塞锥形瓶内，精密加入枸橼酸-磷酸氢二钠缓冲液（pH4.0)25 mL，振摇5分钟，放置过夜，用干燥滤纸过滤，取续滤液为供试品溶液。

供试品的测定

精密量取供试品溶液与对照品各2mL，分别置分液漏斗中，各精密加入枸橼酸-磷酸氢二钠缓冲液（pH4.0)10 mL，再精密加入用上述缓冲液配制的0.04%溴甲酚绿2mL，摇匀，用10mL氯仿振摇提取5分钟，待溶液完全分层后，分取氯仿液，用氯仿湿润的滤纸滤入25mL量瓶中，再用氯仿提取3次，每次5mL，依次滤入量瓶中，并用氯仿洗涤滤纸，滤入量瓶中，加氯仿置刻度。照分光光度法，分别在415nm波长处测定吸收度。

注：分光光度法应以配制供试品的同批溶剂为对照，采用1cm的石英吸收池。以吸收度最大的波长作为测定波长，一般供试品的吸收度读数，以在０.３－０.７之间的误差较小。仪器的狭缝波带宽度应小于供试品吸收带的半宽度，否则测得的吸收度偏低。狭缝宽度的选择，应以减少狭缝宽度时供试品的吸收度不再增加为准。由于吸收池和溶剂本身可能有空白吸收，因此测定供试品的吸收度后应减去空白读数，再计算含量。