方法名称： |
止咳宝片—吗啡的测定—高效液相色谱法 |
应用范围： |
本方法采用高效液相色谱法测定止咳宝片中吗啡的含量。 本方法适用于中西药复方制剂止咳宝片。 |
方法原理： |
供试品, 除去包衣, 研细, 加氢氧化钙与水少量, 研磨，转移至量瓶中并稀释至刻度,摇匀, 滤过, 续滤液加硫酸铵溶解,用苯振摇提取，提取液用水洗涤, 洗液并入水层后, 用氯仿-乙醇振摇提取，合并提取液, 用水-乙醇混合液洗涤后, 置水浴上蒸干, 残渣加甲醇溶解并定容, 摇匀进入高效液相色谱仪进行色谱分离，用紫外吸收检测器检测吗啡的吸收值，计算出其含量。 |
试剂： |
1. 甲醇（色谱纯) 2 .乙酸铵溶液0.5% 3 .三乙胺（分析纯) 4 .乙醇（分析纯) 5 .氢氧化钙（分析纯) 6 .硫酸铵（分析纯) 7 .苯（分析纯) |
仪器设备： |
1 仪器 1.1 高效液相色谱仪 1.2 色谱柱 Nucleodur C18 Gravity柱(4. 0 mm×250 mm ,5μm)。 1.3 紫外吸收检测器 2 色谱条件 2.1 流动相：甲醇 0.5 %乙酸铵溶液 三乙胺=40 60 0.02 2.2 检测波长：254nm 2.3柱温：室温 |
试样制备： |
1. 对照品溶液的制备 精密称取在105 ℃干燥1h的无水吗啡对照品适量, 加甲醇制成每1mL 含0.12mg 的溶液,摇匀,即得。 2. 标准溶液的制备 精密量取对照品储备液2.0，4.0，6.0，8.0，10.0mL，置于10mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，作为绘制标准曲线的系列浓度标准溶液。 3.供试品溶液的制备 取供试品30片,除去包衣,精密称定,研细,取适量(相当于无水吗啡6mg) ,精密称定,加氢氧化钙1g 与水少量,研磨成糊状后,继续研磨15min ,用水转移至100mL 量瓶中并稀释至刻度,摇匀,放置30min ,用干燥滤纸滤过,精密量取续滤液50mL ,加硫酸铵0.5g ,并使其溶解,用苯振摇提取2次(25 、15mL) ,合并苯液,用水10mL 洗涤,洗液并入水层后,用氯仿2乙醇(1∶1) 60mL 振摇提取1 次,再用氯仿2乙醇(2∶1) 提取3 次(45 、45 、15mL) ,合并提取液,用水10mL 与乙醇5mL 的混合液洗涤后,置水浴上蒸干,残渣加甲醇溶解,转移至25mL 量瓶中,并稀释至刻度,摇匀,即得。 |
操作步骤： |
1.标准曲线的绘制 精密吸取上述标准溶液10μL注入高效液相色谱仪，用紫外吸收检测器测定吗啡的吸收值，以标准溶液浓度对峰面积绘制标准曲线，进行线性回归，得到回归方程。 2. 供试品的测定 精密吸取供试品溶液各10μL注入高效液相色谱仪，用紫外吸收检测器测定吗啡的吸收值，计算出其含量。 |
参考文献： |
古星妙，刘东辉，高英，黄意甜. HPLC法测定复方止咳宝片中吗啡的含量. 中国实验方剂学杂志, 2004, 10(5): 5-6. |
