注射用双黄连(冻干)—黄芩甙和绿原酸的测定—高效液相色谱法

本方法采用高效液相色谱法测定注射用双黄连（冻干)中黄芩甙和绿原酸的含量。

本方法适用于中药制剂注射用双黄连（冻干)。

供试品于容量瓶中，加30%甲醇溶液超声溶解定容，过滤，滤液进入高效液相色谱仪进行色谱分离，用紫外吸收检测器，于波长324nm处检测黄芩甙和绿原酸的吸收值，计算出其含量。

1. 甲醇（色谱纯)

2. 乙酸

3. 三乙胺

1. 仪器

1.1 高效液相色谱仪

1.2 色谱柱

Alltech C₁₈色谱柱（250×4.6mm，5μm)。

1.3 紫外吸收检测器

2. 色谱条件

2.1 流动相：A（5%冰乙酸甲醇溶液) B（0.5%三乙胺水溶液)梯度洗脱（0-35min，A:20-75%，B:80-25%)。

2.2 检测波长：324nm

2.3 柱温：室温

1. 称取供试品

精密称取本品粉末（过五号筛-80目)试样 50mg。

2 .对照品溶液的制备

精密称取黄芩甙和绿原酸对照品2.56mg和1.06mg，置25mL量瓶中，用30%甲醇水溶液超声溶解，定容，溶液中二者的浓度分别为0.0512mg/mL和0.0212mg/mL，作为对照品溶液。

3. 供试品溶液的制备

将供试品置于50mL容量瓶中，加30%甲醇溶液超声溶解定容，过滤，取续滤液为供试品溶液。

注：“精密称取”系指称取重量应准确至所取重量的千分之一。“精密量取”系指量取体积的准确度应符合国家标准中对该体积移液管的精度要求。

1. 标准曲线绘制

精密吸取上述对照品溶液2，4，6，8，10μL注入高效液相色谱仪，用紫外吸收检测器，于波长324nm处测定黄芩甙和绿原酸的吸收值，以进样量对峰面积绘制标准曲线，进行线性回归，得到回归方程。

2. 供试品的测定

精密吸取供试品溶液10μL注入高效液相色谱仪，用紫外吸收检测器，于波长324nm处测定黄芩甙和绿原酸的吸收值，计算出其含量。

马洪波，邓光瑞，李兴斌等. 改进HPLC法测定双黄连粉针中黄芩甙和绿原酸的含量. 中医药学报，1999，（1)：59.