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重组人生长激素的测定—高效液相色谱法-分子排阻色谱法

医药数据库中心 药学论坛 重组人生长激素的测定—高效液相色谱法-分子排阻色谱法
方法名称:
重组人生长激素的测定—高效液相色谱法-分子排阻色谱法
应用范围:

本方法采用高分子排阻色谱法测定重组人生长激素的含量。

本方法适用于重组人生长激素。

方法原理:

供试品制成磷酸盐缓冲液(pH7.0)的溶液,进入高效液相色谱仪进行色谱分离,用紫外吸收检测器,于波长214nm处检测重组人生长激素的吸收值,计算出其含量。

试剂:

1. 异丙醇

2. 磷酸盐缓冲液(pH7.0)

仪器设备:

1. 仪器

1.1 高效液相色谱仪

1.2 色谱柱

适合分子量为5000-60000球状蛋白的色谱用亲水硅胶为填充剂。

1.3 紫外吸收检测器

2. 色谱条件

2.1 流动相:异丙醇+磷酸缓冲液= 3+97

2.2 检测波长:214nm

2.3 柱温:室温

2.4 流速:0.6mL/min

试样制备:

1. 磷酸盐缓冲液(pH7.0)

无水磷酸氢二钠5.18g磷酸二氢钠3.65g,加水950mL,用85%磷酸溶液调pH值至7.0,加水至1000mL。

2. 称取供试品

精密称取本品粉末适量。

3. 对照品溶液的制备

精密称取重组人生长激素单体与二聚体混合对照品适量,用磷酸盐缓冲液制成每1mL含1.0mg的溶液。

4. 供试品溶液的制备

供试品置于索氏提取器中,加磷酸盐缓冲液溶解并定量稀释成每1mL含1.0mg的溶液,混匀,作为供试品溶液。

注:“精密称取”系指称取重量应准确至所取重量的千分之一。“精密量取”系指量取体积的准确度应符合国家标准中对该体积移液管的精度要求。

操作步骤:

分别精密吸取上述对照品溶液和供试品溶液20μL 注入高效液相色谱仪,用紫外吸收检测器,于波长214nm处测定重组人生长激素单体与二聚体的吸收值,计算出其含量。

参考文献:

中华人民共和国药典,国家药典委员会编,化学工业出版社,2005年版,二部,p.413。

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