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体外受精(in vitro fertilization，IVF)及胚胎移植(embryo transfer，ET)是目前治疗不孕症的主要手段。影响IVFET成功率的因素很多，胚胎质量是最重要的因素之一。任何一个IVF，其最终目的就是要达到一个较高的种植怀孕率及获婴率，同时尽量避免多胎的发生。为了实现这一目的，一个好的选择胚胎的标准变得越来越需要，特别是在一个移植周期，当有三个以上的一级胚胎可供移植选择时，这种需要变得更加迫切。解决这一问题的方法就是寻找更多有一定预示作用的判断标准，使其能够指导以后的胚胎选择。在以前人IVF中，主要是根据第2或第3天胚胎的形态学特征，来挑选优质的胚胎进行移植。卵裂期的胚胎一般根据其形态学特征，如卵裂球的数目，卵裂球的对称性，胚胎的碎片程度等或其它的一些可见的特征分为几个级别。所有的这些评价标准都与胚胎的种植和怀孕有关，它虽然简单易行，不损伤胚胎，但这些方法的总体成功率还是比较低的，因为有50%以上的移植胚胎没有进行种植[1]，仍存在一定的局限性。Montfoort(2004)指出，早期卵裂是独立于胚胎细胞形态学和细胞数之外的一种预示因子。为了提高选择胚胎的种植潜力，选择胚胎不应该只依赖移植日的胚胎细胞形态学和细胞数，还应该考虑早期卵裂的发生[2]。还有报道称将胚胎早期卵裂作为选择胚胎的参数可以提高种植率和妊娠率[3]。Salumets(2003)等报道，移植单个胚胎时，早期卵裂胚胎的妊娠率可达50%，而移植非早期卵裂胚胎的妊娠率只有26.4%[4]。由此可见早期卵裂在IVFET中可以作为筛选胚胎质量的参数。而合子的原核构型与卵裂之间又存在着一定的关系,卵裂前,原核将会发生旋转并最终平行于极体方向[5]。本研究的目的就是探讨胚胎早期卵裂及原核构型能否指导移植胚胎的选择及与胚胎发育潜力、种植率、怀孕率之间的关系。
1 资料与方法
1.1 一般资料
本研究材料包括体外受精—胚胎移植(IVFET)和胞浆内单精子注射(ICSI)的不孕症患者129个周期,共1 032个正常受精的卵母细胞。平均年龄(31.1±3.4)岁。异常受精的卵母细胞(多原核或单原核)和取卵失败以及取消移植的周期，均未纳入本研究医.学.全.在.线www.med126.com。
1.2 方法
1.2.1 超排卵
采用长方案促排卵：月经黄体期(约周期第21天)使用GnRHa进行垂体降调节，在月经的2～3d测E2、FSH、LH及B超监测基础窦卵泡，据激素水平及卵泡情况使用促排卵药物，当卵泡直径达到18mm注射HCG，34～36h后在B超引导下取卵。
1.2.2 精子的准备
精液样品以手淫的方法收集于无菌的容器内，液化后，对精液中精子密度、活动性及精子的形态进行评估。根据精子的密度与活力采用梯度离心(300g×8min)或直接上游等不同的方法进行处理。经睾丸穿刺获得的睾丸组织经洗涤后粉碎离心(300g×8min)，取沉淀精子备用。
1.2.3 体外受精(IVF)
经阴道穿刺将卵—冠—丘复合物(OCCCs)取出后，用HTF清洗三遍后，置于HTF培养皿中(100μL/滴，含10%HSA)预培养，4～6h后放入受精液滴中(100μL HTF/滴，含10% HSA)，每个液滴加入2 000～20 000条活动精子，放入37 ℃，5%CO2，饱和湿度的培养箱中培养。
1.2.4 胞浆内单精子注射(ICSI)
ICSI时，将洗涤好备用的精子加入5μL 10%的pvp微滴中，注射的卵母细胞置于5μL含10%HSA的MHTF微滴中，上面覆盖石蜡油，用固定针在9点钟的位置固定卵母细胞，使极体位于6或12点的位置，以注射针吸取单个形态正常的活动精子，于3点的位置将精子注入卵母细胞内，回吸少量胞浆以确保破膜，后缓慢退出注射针，释放固定的卵母细胞，然后注射下一个，方法同上所述。
