医学免费论文:细胞间黏附分子1在红霉素抗炎机制中的作用

来源：本站原创更新：2013-10-15 论文投稿平台

医学免费论文:细胞间黏附分子1在红霉素抗炎机制中的作用

【摘要】目的从分子水平上探讨红霉素(EM)的抗炎作用机制。方法体外培养人支气管上皮细胞(16HBE)，将细胞随机分为8组，先加入EM干预，后加入肿瘤坏死因子α(TNFα)刺激。分组如下：①空白对照组;②TNFα(20 ng/ml,16 h)组;③EM(0.3 μg/ml，24 h)+TNFα(20 ng/ml，16 h)组;④EM(3 μg/ml，24 h)+TNFα(20 ng/ml，16 h)组;⑤EM(30 μg/ml，24 h)+TNFα(20 ng/ml，16 h)组;⑥EM(0.3 μg/ml，48 h)+TNFα(20 ng/ml，16 h)组;⑦EM(3 μg/ml，48 h)+TNFα(20 ng/ml，16 h)组;⑧EM(30 μg/ml，48 h)+TNFα(20 ng/ml，16 h)。然后收集各组细胞分别提取RNA，应用逆转录聚合酶链反应(RTPCR)方法检测细胞间黏附分子1(ICAM1) mRNA的表达。因ICAM1 RTPCR产物分子大小约为700 bp，与原设计产物分子大小490 bp不相符，进一步作基因克隆测序了解基因之间是否具有同源性。结果 ICAM1的RTPCR产物即为目的基因：ICAM1基因。TNFα刺激人支气管上皮细胞(16HBE)后，细胞ICAM1mRNA表达增高。先加入不同浓度及作用时间的EM，后加入TNFα刺激人支气管上皮细胞(16HBE)，各组细胞ICAM1mRNA表达均降低，且提示有浓度与时间依赖性。结论 TNFα能激活人支气管上皮细胞使其ICAM1基因表达增高，促进炎症的发生发展。EM能抑制人支气管上皮细胞ICAM1基因表达，可能是EM的抗炎作用机制之一。

【关键词】人支气管上皮细胞;细胞间黏附分子1;肿瘤坏死因子α;红霉素

Expression of intercellular adhesion molecule 1 mRNA in the antiinflammatory molecular mechanism of erythromycin医.学.全.在.线www.med126.com

LI MeiHua, ZHONG XiaoNing, LIU GuangNan,et al.

Department of Resperatory, the First Affiliated Hospital of Guangxi Medical University, Nanning 530021, Guangxi, China

【Abstract】 Objective To investigate the antiinflammatory molecular mechanism of erythromycin (EM) in order to find a new way to prevent and treat chronic obstructive pulmonary disease (COPD). Methods Human bronchial epithelial cell line 16HBE was cultured with 10% serum DMEM (high glucose). The cells were randomly divided into eight groups: blank control group, TNFα (20 ng/ml,16 h), EM(0.3 μg/ml，24 h)+TNFα (20 ng/ml，16 h), EM(3 μg/ml，24 h)+TNFα (20 ng/ml，16 h), EM(30 μg/ml，24 h)+TNFα(20 ng/ml，16 h), EM(0.3 μg/ml，48 h)+TNFα (20 ng/ml，16 h), EM(3 μg/ml，48 h)+TNFα(20 ng/ml，16 h), and EM(30 μg/ml，48 h)+TNFα (20 ng/ml，16 h). Then total cellular RNA was extracted to detect the expression of ICAM1 mRNA by RTPCR. The molecular size of ICAM1 RTPCR production was not correspondent for what it was designed，therefore，clone sequencing was applied to confirm it. Results ICAM1 RTPCR production was ICAM1 mRNA. ICAM1mRNA was increased by the addition of TNFα,which was inhibited by the preincubation with EM in dosedependent and timedependent fasion. Conclusions ICAM1mRNA can be increased by the stimulation of TNFα, which indicate that EM modify inflammation presumably by suppressing ICAM1mRNA in human bronchial epithelial cells.

【Key words】 Human bronchial epithelial cells;ICAM1;TNFα;Erythromycin

　长期应用小剂量红霉素(EM)治疗慢性气道感染性疾病〔弥漫性泛细支气管炎、支气管哮喘、支气管扩张、慢性阻塞性肺病等(COPD)〕取得良好的效果已经得到临床资料证实〔1～4〕。研究发现，这种疗效与EM抗菌活性无关，而与EM的抗炎活性密切相关〔5，6〕。EM在体内外对许多致炎细胞因子的产生均有调节作用，但是，EM抗炎作用机制仍不清楚。本实验设计研究EM对ICAM1基因表达的影响，从分子水平上探讨EM的抗炎作用机制，为临床防治老年慢性阻塞性肺病提供新的思路。

1 材料与方法

1.1 材料高糖(DMEM)培养基为Hyclone公司产品，胎牛血清为杭州四季青生物工程材料有限公司产品，肿瘤坏死因子(TNFα)系Sigma公司产品，EM系Amresco公司产品。总RNA提取试剂Trizol购自Invitrogen公司，AMV逆转录酶和dNTPs购自美国Promega公司，TaqDNA聚合酶购自TAKARA公司，DEPC系美国Serva公司产品，琼脂糖购自上海生工生物工程公司。琼脂糖凝胶回收试剂盒及pGEMTeasy试剂盒(含T4 DNA连接酶)系Qbiogene公司产品。常规试剂：异丙醇、乙醇、氯仿、Tris粉、EDTA等系国产分析纯试剂。OligodT15，βactin引物：上游5′TGACGGTCAGGTCATCACTATCGGCAATGA3′，下游5′TTGATCTTCATGGTG(AGC) TAGGAGCGAGGGCA 3′，由上海生工生物工程公司合成。ICAM1引物：上游5′AGGTGGCCGGCCAGCTTATA3′，下游5′CCTGTCCCGGGATAGGTTCA3′，由北京奥科生物技术有限责任公司合成。

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