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M1：TCS处理前甲基化产物;U1：处理前非甲基化产物;M2：80 mg/L TCS处理后甲基化产物;U2：80 mg/L TCS处理后非甲基化产物;N：水对照;PM：甲基化对照;PU：非甲基化对照
3 讨论
TCS为247个氨基酸残基组成的单一多肽链， TCS属于RNA N-糖苷酶型，专一水解核糖体28S rRNA第4324位腺苷酸的N-C糖苷键，从而引起核糖体某些区域构象的改变，影响核糖体的生物学功能，从而发挥肿瘤抑制作用[3]。TCS对HeLa细胞增殖有明显抑制作用，呈量效关系。TCS浓度与HeLa细胞增殖抑制率存在线性回归关系(P<0.01)，TCS 160 mg/L作用72 h抑制率最大，为79.79%。
一个细胞周期包括有丝分裂期(M)和分裂间期(G1、S、G2)，调控关键在分裂间期。TCS作用HeLa细胞48 h后，随TCS浓度增大，S期细胞百分比对照组明显增加(P<0.01)，G2/M期细胞明显减少(P<0.05)。提示HeLa细胞阻滞于S期,不能顺利地进入G2/M期。细胞的DNA不能在S期得到准确的复制，从而影响细胞增殖。细胞周期的进行由不同的周期蛋白(Cyclins)所调控。TCS作用于何种周期蛋白及其作用机制尚需进一步研究。
细胞增殖失控和凋亡受阻是肿瘤发生、发展的主要原因,抑制细胞增殖，诱导肿瘤细胞凋亡是肿瘤治疗的重要手段之一。TCS能诱导HeLa细胞凋亡，且TCS浓度与凋亡率之间存在量效关系。有研究表明，天花粉蛋白具有核酸内切酶功能，能够切割细胞DNA超螺旋结构，导致细胞损伤[4]。另外，TCS可能通过与受体结合,引起细胞内信号途径的激活或抑制,从而启动细胞内的凋亡信号,导致细胞凋亡[5]医.学全.在.线网站www.med126.com。
最近研究直接分析了基因启动子的CpG岛甲基化，并与杂合性丢失或突变分析相结合, 证实启动子高甲基化是抑癌基因失活的第三种机制，并且在某些情况下是抑癌基因失活的唯一机制[6-7]。甲基化的核苷酸序列并未改变,仅通过个别碱基的修饰影响基因转录,且甲基化过程是可以逆转的。APC基因是Wnt信号传导通路中重要的抑癌基因，该基因启动子甲基化引起的基因表达缺失可导致Wnt信号传导通路的异常从而导致肿瘤的发生。APC基因启动子高甲基化及基因转录缺失已见于结、直肠癌、食道癌、胃癌、肺癌、乳腺癌、胰腺癌、子宫内膜癌、T淋巴细胞瘤等肿瘤[2]。本课题组以往研究发现APC基因启动子高甲基化在宫颈癌组织标本DNA中为频发事件(95例宫颈癌标本阳性率为56.8%)，在宫颈癌各阶段均有发生，且APC甲基化阳性率随肿块增大及淋巴结转移而增高[8]。逆转APC基因启动子高甲基化状态，从而使APC基因转录激活，恢复APC基因表达，可能为宫颈治疗提供新的途径。本研究发现，TCS处理前，HeLa细胞APC基因启动子处于半甲基化状态，即MSP检测APC基因启动子甲基化产物及非甲基化产物均为阳性。20、40 mg/LTCS处理细胞48 h后甲基化状态未改变。80 mg/L TCS处理HeLa细胞48 h后，处于半甲基化状态的APC基因启动子出现了去甲基化(图1)。APC基因启动子甲基化可导致基因转录失活而致APC mRNA和APC蛋白表达缺失。当APC蛋白缺失,则不能和β-catenin结合,累积的β-catenin转位到细胞核和Tcf4结合成复合体,启动增殖相关基因(如C-MYC)转录,最终导致细胞生长失控[9]。而APC基因启动子去甲基化可恢复HeLa细胞中APC基因表达，并恢复HeLa细胞膜上β-catenin的表达[10]。TCS诱导APC基因启动子去甲基化作用可能为TCS抑制HeLa细胞增殖的作用机制之一。王艳华等[11]发现TCS 对HeLa细胞中启动子发生子甲基化失活的TSLC1(Tumor suppressor in lung cancer1) 基因也有去甲基化作用。TCS去甲基化作用为其抗宫颈癌作用提供了新的机制，也为TCS抗宫颈癌临床应用提供了新的实验依据。
现今最常用的甲基化抑制剂为5-氮杂-2′-脱氧胞苷等胞苷类似物,由于较强致突变性临床应用受限。TCS作为引产药已应用于临床，在抗绒癌方面研究也相当广泛，其副作用较一般化疗药明显为小。TCS具有抑制宫颈癌HeLa细胞增殖的作用，可抑制细胞周期，诱导HeLa细胞凋亡及APC基因去甲基化，有良好的临床应用前景。其早日应用于临床抗宫颈癌治疗，将为宫颈癌患者康复带来新的希望。
