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医学免费论文:快速筛选调节肝脂酶活性中药成分方法的研究

来源:本站原创 更新:2013-9-27 论文投稿平台

人类HL和脂蛋白脂肪酶(LPL)同属于脂酶家族,然而却是两种不同性质的酶。HL活性不需要ApoCⅡ和肝素激活作为激活剂,不受高盐浓度及鱼精蛋白的抑制,并且其底物特异性不高;而LPL活性目前只能在肝素化后进行。因此,可以在高浓度钠盐而无肝素的反应系统中直接用比色法测定肝脂酶活性[10]。

细胞分子靶标是新药研发的常见快速筛选模型。用HL建立影响HL活性的药物筛选模型有望快速筛选到中药活性成分。但由于制备纯化HL的方法复杂,成本高,一般实验室难以用纯化HL进行大规模筛选实验。比色法是检测大鼠肝匀浆HL活性水平的经典方法[8-10],为便于在HL分子靶标水平筛选调节HL活性的药物,本研究用大鼠肝匀浆和比色法测定HL活性,建立检测HL活性的快速筛选模型。

研究表明大鼠肝组织匀浆制备的HL酶活性很高,而且较稳定,在-70 ℃下保存其活性可维持稳定1个月以上。在pH 9.5的磷酸钾缓冲液中具有明显的酶促动力学特性,其HL脂解活性有明显Ca2+依赖性,受钙拮抗剂盐酸异丙嗪的抑制并受表面活性剂SDS的抑制,符合文献纯化HL的酶促动力学特性[1,11]。本研究结果显示,大鼠肝组织匀浆中HL酶丰富,制备方法简单易行,成本很低,配合成熟的脂酶活性比色法检测,可用于快速筛选影响HL酶活性的中药调脂活性成分,并从有效方药组分中筛选得到有增强和抑制HL活性的组分。首次实验证明,使用大鼠肝组织匀浆和脂酶比色测定HL活性是快速筛选影响HL活性中药活性成分的灵敏、稳定、可靠的方法。

复方贞术调脂方(FTZ)对饮食性高脂血症模型大鼠能使其降低的肝组织和血浆中HL活性恢复至正常水平[7]。本研究还从FTZ的成分中筛选得到有明显增强HL酶活性的HL激活剂人参皂苷Rb2和齐墩果酸,其可能是复方贞术调脂方提升饮食性高脂血症大鼠肝组织肝脂酶(HL)活性的物质基础之一。

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