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医学论文范文:辛伐他汀防治心肌细胞肥大效应及其与钙通道关系的研究
【摘要】 目的：探讨辛伐他汀对心肌细胞肥大的防治作用及其与钙通道活动的关系。方法：采用血管紧张素Ⅱ诱导新生大鼠心肌细胞肥大模型。应用改良Lowry法测定心肌细胞总蛋白含量。相差显微镜测定心肌细胞表面积。CCK-8法检测心肌细胞活力变化。western blot方法检测心肌细胞 L-型钙通道亚单位Cav1.2(α1C)、T-型钙通道亚单位Cav3.1(α1G)、Cav3.2(α1H)蛋白表达的变化。应用激光共聚焦显微镜技术检测[Ca2+]i的变化。结果：(1)辛伐他汀能明显抑制AngⅡ诱导的心肌细胞总蛋白含量及细胞表面积的增加，同时提高心肌细胞活力;(2)辛伐他汀能明显降低心肌细胞T-型钙通道α1G、α1H蛋白表达，但对L-型钙通道α1C蛋白表达无明显影响;(3)辛伐他汀可呈剂量依赖性抑制心肌细胞肥大所致的钙离子超载。结论：辛伐他汀对AngⅡ诱导的心肌细胞肥大具有明显的防治作用，其作用机制可能与辛伐他汀抑制T-型钙通道α1G、α1H蛋白的重新再表达有关，并与其抑制细胞内钙超载密切相关。
【关键词】 心肌细胞肥大;T-型钙通道;L-型钙通道;辛伐他汀
The effects of simastatin on calcium channels in preventing cardiac hypertrophy
GEN Peng，WU Yang，YANG Huichao，et al (Institute of Nautical Medicine, Nantong University, Nantong 226001 )
[Abstract] Objective: To investigate the effects of simvastatin on calcium channels in preventing cardiac hypertrophy.Methods:Total protein content was measured by Lowary,s method and the cell surface area was measured by phase contrast microscope.CCK-8 method was used to observe the viability of myocardiocytes. The expression of α1C、α1G and α1H were detected by western blot. Intracellular Ca2+ were measured with Fluo-3/ AM under confocal laser microscope.Results: The total protein content and cell size of cardiomyocytes increased significantly and the cardiomyocyte viability decreased in AngⅡ treated cells and these effects could be blocked by simvastatin.The protein of α1G and α1H were significantly increased after AngⅡtreatment, which could be inhibited by simvastatin or verpamil hydrochloride. But the protein level of L-type calcium channel α1C was no significant difference between each group.Intracellular calcium overload was remarkably inhibited by simvastatin with a concentration-dependent manner.Conclusions:SIM can inhibit Ang Ⅱ-induced cardiomyocyte hypertrophy, which may be related to the inhibition of the increasing of T-type calcium channel subunit α1G、α1H, and meanwhile to the inhibition of calcium overloading医学 全在.线提供www.med126.com.
[Key words] Cardiac hypertrophy; T-type calcium channel; L-type calcium channel; Simvastatin
心肌肥大是心血管疾病的一种常见的并发症，是引起猝死、心力衰竭的独立危险因素。心肌肥大不仅是细胞体积的增大，还涉及心肌细胞离子通道、离子流及膜电位的变化。近年来随着细胞电生理学和分子生物学技术在心血管疾病研究领域的广泛应用，关于钙通道在心肌肥大中的作用正逐渐被人们所关注。近年来有研究发现[1]他汀类药物可能具有防治心肌肥大的作用，但其作用机制的研究则少见报道。本研究采用血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ, AngⅡ)诱导心肌细胞肥大模型，观察他汀类药物辛伐他汀(simvastatin,SIM)对心肌细胞肥大的防治作用，同时观察SIM对心肌细胞L-型钙通道α1C和T-型钙通道α1G、α1H各亚单位蛋白表达的影响，以及心肌细胞内Ca2+的变化，从而深入探讨SIM对心肌肥大的防治作用及其机制。
1 材料和方法
1.1 主要药物和试剂 SIM (浙江瑞邦药业有限公司);AngⅡ(Sigma 公司);盐酸维拉帕米(Verapamil hydrochloride, Ver)(河北医科大学海森医药有限公司);甲羟戊酸(Mevalonolactone, MVA)(Sigma公司)。
1.2 动物与分组 新生1~3天SD大鼠，由南通大学实验动物中心提供。实验分组：(1)对照组(Control组);(2)AngⅡ组(10-6mol/L);(3)AngⅡ+Ver(10-7mol/L)组;(4)AngⅡ+SIM(10-6mol/L)组，(5)AngⅡ+SIM+MVA(10-4mol/L)组。
1.3 心肌细胞培养 新生SD大鼠，75%乙醇消毒，取心脏置预冷的D-Hanks液中，将心室肌切碎约1 mm3、加入10 ml 0.125%胰酶，搅拌消化10 min，弃上清，吹打分散细胞，孵育8 min。经滤网过滤后，接种于100 mm规格的无菌组织培养瓶中，于5%CO2、高湿度的37 ℃培养箱中放置2 h。孵育后，收集所有培养液，台盼蓝染色观察细胞存活率，细胞计数后将细胞密度调整至(5~6)×105 cells/L接种于6孔培养板，每孔2 ml。每孔加入Brdu使其终浓度为0.1 mmol/L。培养48 h后，换无血清培养基，24 h后加入干预因素。
