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1 实验材料
1.1 主要试剂
脱氧胆酸钠:国药集团化学试剂有限公司,批号F20070521；丙硫氧嘧啶:广东华南药业有限公司,批号070501；胆固醇:天津大茂化学试剂厂,批号20070518； 吐温80:上海申宇医药化工有限公司,批号061201；1,2丙二醇:广州化学试剂厂,批号2005/2031； TC试剂盒: 中生北控生物科技股份有限公司,批号070471； TG试剂盒:中生北控生物科技股份有限公司,批号071761。
1.2 药物
复方贞术调脂胶囊:1.74 g生药/粒,由广东药学院药物研究所提供；非诺贝特:法国利博尼制药公司,批号:90383。
1.3 仪器
FA2104型上皿电子天平:上海精密科学仪器有限公司；TG16GA高速离心机:上海安亭科学仪器厂；UV1800型紫外可见光光度计:北京瑞利分析仪器公司；DKS26型电热恒温水浴锅:上海精密实验设备有限公司；显微镜: Olympus cx21。
1.4 动物
SPF级SD大鼠,由广东省医学实验动物中心提供,合格证号:2007A003。
2 方法
2.1 高脂乳剂的制备
制备方法根据文献［5］报道方法加以改进。取25 g猪油,加热到100 ℃左右使其溶解,加入10 g胆固醇,搅拌至完全溶解;再加入1 g丙硫氧嘧啶和25 mL吐温80,充分搅匀。在另一烧杯中加入蒸馏水30 mL和 1,2丙二醇20 mL,加热至60 ℃,加入脱氧胆酸钠2 g,充分搅拌直至溶解。将两种溶液充分混匀,制成高脂乳剂。
2.2 动物分组
取60只SD大鼠,体质量180～220 g,随机分为6组,每组10只，即正常组、模型组、复方贞术调脂胶囊高剂量组（6.4 g生药/kg)、中剂量组（3.2 g生药/kg)、低剂量组（1.6 g生药/kg)和非诺贝特组（40 mg/kg)。除正常组自由摄取普通饲料外,其余组分别在此基础上每天上午按10 mL/kg量灌胃给予高脂乳剂,4 h后各给药组分别灌胃相应药物,正常组、模型组给予等量生理盐水,连续给药8周。
2.3 检测指标及检测方法
2.3.1 肝指数和肝组织病理形态学检查 末次给药1 h后,脱臼处死大鼠,立即摘取肝脏,用冰生理盐水清洗,滤纸吸干,用分析天平称其湿重后,计算肝指数（肝指数=肝湿重/体质量×100)。再在肝左叶取一块3 cm×3 cm肝组织,用10％（φ)甲醛溶液固定,常规石蜡包埋、切片、HE染色,光学显微镜下观察细胞脂肪变性程度。肝脏细胞脂肪变性按以下标准判断 ［6］：低倍镜观察含脂滴细胞数与总细胞数，二者比值划分为0,<1/3,1/3～1/2,1/2～2/3,>2/3,相应脂肪病变等级为（-)、（+)、（++)、（+++)、(++++),若含脂滴细胞数与总细胞数之比值>1/3即诊断为脂肪肝，其中占肝小叶1/3～1/2为轻度脂肪肝；占肝小叶1/2～2/3为中度脂肪肝；占肝小叶2/3以上或肝细胞弥漫脂肪变性呈鱼网状为重度脂肪肝医.学全.在.线网站www.med126.com。
2.3.2 肝脏脂质测定 称取相同部位肝脏组织0.5 g,并剪碎,用提取液(氯仿∶甲醇=1∶1体积比)制成匀浆后，提取液定容至5 mL,混匀。经24 h震荡抽提, 3 000 r/min离心5 min得上清液,分别采用氧化酶法、磷酸甘油酶法测定肝脏中TC、TG。
2.4 统计学处理
用SPSS 10.0统计软件进行统计,数据以±s表示,各组间比较采用方差分析,等级数据用Ridit分析,P<0.05为差异有显著性。
3 结果
3.1 复方贞术调脂胶囊对非酒精性脂肪肝大鼠肝脏病理的影响
3.1.1 肉眼观察 正常组大鼠肝脏外观正常,颜色鲜红,有弹性,被膜光滑,无病变迹象。模型组动物肝脏体积明显增大,包膜紧张,边缘变钝,表面无光泽,呈局灶性黄白色变性灶,切面有明显油腻感,呈奶黄色，呈典型脂肪变。复方贞术调脂胶囊高、中剂量组较模型组有明显改善,肝脏颜色、质地均接近正常。复方贞术调脂胶囊低剂量组较模型组有所改善,肝脏颜色偏黄,有一定光泽度,肿胀程度较模型组轻,切面有油腻感。非诺贝特组体积增大,质地较脆。
3.1.2 光镜观察 正常组：大鼠肝小叶结构明显,汇管区清晰可见,肝细胞索呈放射状排列,肝窦正常,中央静脉内皮细胞清晰可见,肝细胞形态规则,呈多边形整齐排列,胞浆染成红色,均匀。肝细胞核位于细胞中央,胞核清晰。肝细胞无变性。模型组：肝组织有明显脂肪变性和水样变性，肝小叶结构不明显,肝索完全解离,肝窦狭窄或消失,中央静脉扩张,内皮细胞缺失。肝细胞肿大,细胞核被挤压变形,部分严重者脂滴融合,将细胞核挤到细胞一边、部分消失。胞浆染色不均匀,部分消失,充满大量脂肪空泡。间质组织中有炎症反应,局部有淋巴细胞和浆细胞的浸润。
