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药理学实验指导-第二篇 机能实验:第九章 循环系统

药理学实验指导第二篇 机能实验:第九章 循环系统:第九章 循环系统第一节 急性犬失血性休克及其救治 【实验目的】(1)用放血的方法复制犬失血性休克模型。(2)观察失血前和失血性休克后血流动力学改变和微循环变化。(3)探讨失血性休克的发生机理,熟悉救治措施。(4)观察补充血容量和给血管活性药物治疗后血流动力学改变和微循环变化。【实验原理】根据微循环学说,休克〈shock)可以定义为各种原因引起有效循环血量减少,微循环灌流障碍,引起重要生命器官血液灌

第九章  循环系统

第一节  急性犬失血性休克及其救治

  

实验目的

(1)用放血的方法复制犬失血性休克模型。

(2)观察失血前和失血性休克后血流动力学改变和微循环变化。

(3)探讨失血性休克的发生机理,熟悉救治措施。

(4)观察补充血容量和给血管活性药物治疗后血流动力学改变和微循环变化。

【实验原理】

根据微循环学说,休克〈shock)可以定义为各种原因引起有效循环血量减少,微循环灌流障碍,引起重要生命器官血液灌注不足,从而导致细胞功能紊乱的全身性病理过程,也称为休克综合征(shock syndrome)。

休克的病因有许多种,本实验采用颈动脉放血的方法,直接减少有效循环血量,复制低血容量性休克(hypovolemic shock)模型。由于放血一定程度后可使循环血量不足,静脉回心血量减少,血压下降,通过压力感受器反射,引起交感神经兴奋,外周血管收缩, 组织灌流量急剧减少,导致失血性休克 (IMInorrhagic shock)。通过输液,补充血容量,抢救休克,同时使用不同血管活性药物,比较其疗效,分析它们在失血性休克治疗中的作用。

实验动物

家犬,10-20kg,性别不拘。

【实验药品与器材

3%戊巴比妥钠、125单位/ml肝素生理盐水、生理盐水、微循环灌流液(台氏液加1%明胶)、5%葡萄糖液、酚妥拉明,手术器械,10ml、20ml、50ml注射器,100ml烧杯、储血瓶,输尿管插管、动脉导管及压力传感器、静脉导管及压力传感器、呼吸传感器、微循环观察装置(灌流盒、连续变倍显微镜) ,生物信息采集处理仪,AVL血气分析仪。

【实验观察指标

(1)血流动力学指标:动脉血压、脉压差、心率、中心静脉压。

(2)微循环指标:微血管内血流速度、微血管直径、毛细血管数/固定视野内、白细胞附壁及嵌塞。

(3)尿量(滴或ml/min)。

(4)呼吸频率与幅度。

(5)休克前和休克后血气和酸碱指标变化:动脉血pH、PaO2、PaCO2、AB、SB和BE。

【实验方法与步骤

(1)成年家犬一只,称重后,静脉注射3%戊巴比妥钠1ml/kg 全身麻醉。

(2)将麻醉犬仰卧固定于犬实验台,颈前部和腹股沟部备皮。作长6~8cm的颈部正中切口,分离出气管,在甲状软骨下2~3cm处作倒“T” 形切口,插入Y型气管插管并固定,Y型管一侧与呼吸传感器相www.med126.com连,信号传入生物信息采集处理仪记录呼吸变化。

(3)分离左颈总动脉,插入动脉导管,压力信号经压力传感器传入生物信号采集处理仪,记录动脉血压和脉压差。分离右颈外静脉,插入静脉导管(插入导管长度约15cm左右,相当于上腔静脉入右心房口处) ,压力信号经压力传感器传入生物信号采集处理仪,记录中心静脉压。

(4)在左侧腹股沟部触及股动脉搏动后,沿动脉走行方向作约4cm长切口,分离出左股动脉和静脉,分别作股动脉和股静脉插管,两插管经三通与储血瓶和输液瓶相连通,以备放血和输液。插管操作完毕先从输液瓶向股静脉缓慢输入生理盐水(5~10滴/分) ,保持静脉畅通。

    (5)在耻骨联合上作下腹部正中切口(切口长约5cm) ,找到膀胱,排空尿液后,将膀胱从腹腔拉出,在背面膀胱三角区找到双侧输尿管入口,分离双侧输尿管并插入输尿管插管,记录每分钟尿滴数。

(6)在右侧腹直肌旁作约6cm长切口,钝性分离肌层,打开腹腔后,轻轻拉出一段游离度较大的小肠肠袢,放置在微循环恒温灌流盒内,使肠系膜置于灌流盒载物台上,用显微镜观察肠系膜微循环。

(7)放血前记录观察指标:观察记录血流动力学指标、微循环指标、尿量、呼吸、血气和酸碱指标。

(8)放血复制失血性休克;

①记录各项指标后,将与股动脉插管相连的三通向储血瓶开放,降低储血瓶高度并松开动脉夹,快速放血,在15分钟内使平均动脉压降至40mmHg。调节储血瓶高度以长期维持血压在40mmHg。为防止血液凝固,储血瓶内应在股动脉插管前加入肝素生理盐水5mg。

②根据实验时间决定维持40mmHg血压时间的长短,维持时间不应少于30分钟,在此段时间内应观察记录好各项指标的变化。

(9)失血性休克救治:

①用动脉夹夹闭股动脉近心端停止放血,三通开关向输液瓶开放。将储血瓶内的血液倒入瓶口有双层过滤纱布的输液瓶内,快速从股静脉输回血液及与失血量等量的生理盐水(250滴/分)。

②输血输液后,观察记录各项指标以及微循环恢复状况。

③用酚妥拉明10mg加入100ml 5%葡萄糖溶液中静脉滴注,100滴/分。输注完毕后,观察记录各项指标以及微循环变化。

注意事项

(1)尽量减少手术性出血,勿使用手术刀和剪刀分离血管和肌层。

(2)牵拉肠袢要轻,以免损伤肠系膜影响微循环观察或引起低血压。

(3)压力传感器内应事先充盈肝素生理盐水并排尽气泡,安置高度应与心房水平一致。

(4)观察微循环时,应始终固定视野,先选好标志血管,分清动脉、静脉和毛细血管,画出观察视野图并标明动脉、静脉和毛细血管。

思考题

(1)如果不给失血性休克家犬输回原血,或者临床上救治失血性休克病人又暂时得不到血液,你将如何进行救治?请设计救治方案。

(2)为防止缺血缺氧对组织细胞损害,还可选择哪些药物?

(3)本实验中是否存在缺血-再灌注损伤?

 (金海燕)

第二节   药物的量效关系与竞争性拮抗

实验目的

   (1)观察应用酚妥拉明前后,不同剂量新福林对离体主动脉的收缩作用,加深对激动剂、拮抗剂、量效关系和竞争性拮抗的理解。

   (2)了解离体血管实验方法。

实验原理

在一定范围内药物随剂量或浓度的增加,药理效应也相应增加。以效应为纵坐标,剂量或浓度的对数值为横坐标,可绘制出对称的“S”型曲线。竞争性拮抗药与激动药并用时,能与激动药互相竞争与相同的受体结合,降低激动药与受体的亲和力,而不影响其内在活性,故可使激动药的量效曲线平行右移。

本实验选择对α1受体有兴奋作用的新福林,应用家兔的胸主动脉血管环为标本(含α1受体)进行实验,按累积浓度进行实验,观察应用酚妥拉明前后,随着新福林剂量的增加,血管环收缩效应的变化,从而绘制量效曲线。

实验对象

家兔1只,1.8~2.5kg,雌雄不拘。

【实验药品与器材

1.药品

酚妥拉明:10-5 M,新福林:10-8 M、10-7 M、10-6 M、10-5 M、10-4 M、10-3 M、10-2 M、。

2.器材

生物信号采集处理仪、张力传感器、离体血管浴槽装置一套、超级恒温水浴器、氧气钢瓶、手术器械一套,培养皿、烧杯、1毫升注射器、万能支架、克氏液、砝码等,

【实验观察指标

用药前后血管环张力变化。

【实验方法与步骤

   (1)准备好灌流系统,调节浴槽水温于37.4 ℃,调节恒温浴槽中克氏液为20 ml,标记好液面高度,连接并调好张力传感器和生物信号采集处理仪。

   (2)取家兔一只,于耳缘静脉注射空气处死。迅速打开胸腔,摘除心肺,找到并取出整段胸主动脉(约6 cm),放入盛有预先冰冷的充氧克氏液的培养皿中。用克氏液将淤血冲洗干净,仔细剥离血管壁结缔组织,然后将血管剪成宽约4 mm的血管环。用两个不锈钢的钩将血管环置于浴槽内,一端固定于浴槽底部,另一端与传感器相连(图9-3),控制通氧速度为每秒1~2个气泡。

 


图9-3 离体血管描记装置

   (3)血管环取静息张力5 g平衡约45 min后,走一段基线,从10-8 M浓度开始,依次加入浓度按对数值等距递增的新福林溶液0.2 ml(稀释100倍),至收缩达最大值(增加剂量不再使收缩加强)为止。换入新鲜克氏液冲洗3~4次,重新平衡约20分钟,使血管张力恢复到基线位置。预先加入酚妥拉明10-5 M(终浓度)0.2 ml。然后重复上述给药步聚,观察收缩幅度的变化。

   (4)实验完毕,打印记录结果,测量每次加新福林后收缩曲线高度,换算为收缩力,以g表示。

将结果填入表9-1中。

表9-1不同浓度新福林引起血管环收缩幅度(g)

中国卫生人才网

10-8

10-7

10-6

10-5

10-4

10-3

10-2

用酚妥拉明前

用酚妥拉明后

   (5)以血管环收缩幅度为纵坐标,药物对数浓度为横坐标,将应用酚妥拉明前后新福林引起血管环收缩的两条量效曲线绘入同一坐标纸上。

【实验注意事项

(1)制备血管环时,不要用镊子用力夹,不要过分牵拉,以免损伤血管内皮。

(2)浴槽内的的温度控制必须在37.0土2℃,氧气供给量不宜过大。

(3)平衡要好,整个操作期间不能有振动,否则需重新平衡15 min以上。

(4)本实验属于定量观察,每次所加液量、药量必须准确。

思考题

   (1)什么是激动剂?什么是拮抗剂?

   (2)何谓竞争性拮抗?其量效关系曲线将如何改变?

(庹勤慧  黄红林)

 

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