第一节　　第二节　　第三节　　第四节　　第五节　　习 题

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二、基本条件

（一）特异性抗体

1．抗体亲和力

抗体亲和力（antibody affinity）是抗体与抗原之间相互作用的一种结合能力或强度。亲和力大即免疫结合既快又牢固，不易重新解离。

　　　　　　　　　　 k₁

Ag  +  Ab　　Ag-Ab

　　　　　　　  k₂　　　　　　　　　　　　　　　　　　              

    亲和力的大小用亲和常数（affinity constant）K_a值来表示，K_a＝ k₁　/　k₂　，一般要求K_a值在10¹⁰～10¹² L/M之间。

亲和常数K_a的计算最常用的方法是标准作图法：即以B/F为纵坐标，以［B］为横坐标，得到一条直线，其斜率的负数即为K_a （图13-3）。

图13-3  标准分析图

 亲和常数K_a还可利用常规RIA中的几个参数进行计算：

                                                 6×B₀%

     K_a ＝ -----------------------------------------------------------

                    （1－B₀%）（2－B₀%）（4－B₀%）（3ED₅₀－ED₂₅）

式中B₀%为零标准管的结合率，ED₅₀和ED₂₅分别为结合率为50%和25%时对应剂量，可由标准曲线上查得。

2．抗体特异性

指抗体分别与相应抗原和抗原结构类似物的结合能力的比较。抗体与相应抗原结合能力强，而与该抗原结构类似物结合能力弱，则特异性高。抗体与抗原结构类似物的结合称交叉反应（cross reaction）。

交叉反应率 = ED₅₀（B）/ ED₅₀（A）× 100%  （图13-4）。

图13-4  交叉反应试验

3．抗血清滴度

以免疫反应中所需抗血清(antiserum)的稀释度的倒数来表示，稀释倍数越高，滴度(titer)越高，表示抗体的效价越高。

在实际工作中要找出抗血清的最适稀释度，即与抗原比例最适当、检测抗原特异性最高、标准曲线斜率最大的稀释度（图13-5）。

图13-5  抗血清滴度曲线 

    测定方法：将抗血清稀释成不同浓度，分别加入恒量标记抗原，经温育后分离B、F，求出不同稀释度的B%，以稀释度为横座标，B%为纵座标，绘制出抗血清滴度曲线（antiserum titer curve），一般以B%为30%～50%的抗体稀释度为最适稀释度。